Статья: 50 лет со времени состоявшегося в Беларуси I Съезда врачей-лаборантов и его основополагающий вклад в реализацию намеченного курса совершенствования деятельности национальной клинической лабораторной службы (2025)

Представлена стратегия программы клинико-лабораторного исследования соматических заболеваний, раскрытая на примере патологии гепатобилиарной системы. Включает в себя 3 последовательно выполняемых этапа, первый из которых составляет спектр видов клинико-лабораторного исследования, достаточный для получения значимой информации с использованием минимального перечня лабораторных тестов; второй – алгоритм расширенного (углубленного) исследования, обоснованный результатами первого его этапа, а третий – специфические иммунохимические тесты, применяемые как для подтверждения синдрома патологии, так и для получения представления о возможном патогенетическом механизме его формирования.

Введение. В практике выполнения ординарных и особенно научно-практических клинико-лабораторных исследований нередко встречаются ситуации, когда исследователь вынужденно прибегает к использованию однотипных по назначению лабораторно-диагностических тест-систем разных фирм-производителей, значительно различающихся показателями аналитической чувствительности и пределами измерений. Представленный методологический подход к статистическому анализу фактически измеренных концентраций маркеров апоптоза и эндотелиальной дисфункции в сыворотке крови и моче с использованием иммуноферментных (ИФА) тест-систем, различающихся показателями аналитической чувствительности и пределов измерений, позволяет нивелировать те недостатки, которые не могут не возникать в силу отличий в аналитических характеристиках, присущих тест-системам разных фирмпроизводителей. Обсуждается возможность применения этой методологии в качестве инструмента для математического преобразования фактически полученных результатов в пригодные для корректного статистического анализа.

Цель. Разработка методологии статистического анализа на основании полуколичественной оценки результатов измерений концентрации в сыворотке крови и моче гранзима Б, цитокератина-18, аннексина-V, интерлейкина-6, эндотелина-1, ICAM-1 однотипными по назначению наборами ИФА-реагентов разных фирм-производителей, отличающихся аналитической чувствительностью и пределами измерений.

Материалы и методы. Обследован 141 пациент с хроническими заболеваниями почек. Методами плашечного иммуноферментного анализа произведено определение содержания гранзима Б, цитокератина-18, аннексина-V, интерлейкина-6, эндотелина-1, ICAM-1 в сыворотке крови и моче с применением тест-систем разных фирмпроизводителей, различающихся пределами их аналитической чувствительности и диапазонами измерений. Учет реакции осуществлялся на фотометре универсальном Ф300 ТП (ОАО «Витязь», Беларусь), спектрометре Magellan V 7.1 (длина волны измерения 450 нм). Статистическая обработка полученного материала проводилась с применением стандартного пакета Statistica 10.0, программы Microsoft Excel. В дополнение к этому полученные результаты подвергались обработке с использованием разработанного метода статистического анализа.

Результаты. На первом этапе были определены концентрации маркеров апоптоза и эндотелиальной дисфункции в сыворотке крови и моче пациентов исследуемых групп и групп сравнения с использованием однотипных по назначению иммуноферментных тест-систем разных фирм-производителей, отличающихся показателями аналитической чувствительности и пределами измерений. Полученные значения содержания одного и того же биологически активного вещества различались между собой на порядок. Таким образом, установлено, что фактические измерения оказались несоизмеримыми и нуждаются в процедуре приведения их к сопоставимым величинам с тем, чтобы вся совокупность полученных результатов стала однородной. Для этого методом анализа смесей (mixture analysis) с использованием компьютерной программы PAST v 3.17 / PAIaeontological Statistics произведено выделение валидных наблюдений, распределенных в середине шкалы, исключая «нулевые» и малые значения, а также выбросы. На следующем этапе фактически полученные данные были приведены к соизмеримым величинам посредством нормировки показателей измеренной концентрации относительно пределов измерений, свойственных соответствующей тест-системе с выражением полученного значения в баллах, кратных 10: определяемое вещество, баллы = концентрация определяемого вещества, ед. изм. / предел измерений тест-системы, ед. изм. × 10.

Заключение. Предложенный методологический подход к оценке результатов лабораторного исследования обеспечивает достоверность статистического анализа фактически полученных данных в случае использования однотипных по назначению ИФА тест-систем, отличающихся аналитической чувствительностью реализуемых с их применением методов исследования и пределами измерений показателей концентрации соответствующего аналита.

Введение. Рост числа патогенных микроорганизмов, устойчивых к лекарственным препаратам, обусловливает необходимость применения современных стандартизированных аналитических методик для получения новых биологически активных веществ из лекарственных растений. Применение препаратов на основе лекарственных растений может стать новым подходом к борьбе с патогенными микроорганизмами. Повышению резистентности организма к влиянию неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды способствует усиление его антиоксидантной защиты.

Цель. Проанализировать антимикробную и антиоксидантную активность компонентов растительного происхождения, возможные механизмы их действия, а также их химический потенциал.

Материалы и методы. Растения очищали и высушивали в течение 7–14 суток в тени при комнатной температуре. Для качественного анализа химической природы растительных компонентов смешивали 20 граммов полученного сухого порошка и 250 миллилитров этанола и подвергали смесь непрерывной экстракции по методу Сокслета. Использованными методами газовой хроматографии с массспектрометрическим завершением (ГХ-МС) идентифицировано 30 компонентов растительного экстракта. Антиоксидантная активность его определялась по методу Хасан (Hasan). Для исследования антибактериальных свойств экстракта плодов растений использовались культуры микроорганизмов Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae и применялись экстракты растительного сырья в концентрации 12,5, 25, 50, 100 и 200 г/л.

Результаты. Максимальная зона ингибирования роста P. aeruginosa и E. coli алкалоидным экстрактом Leucaena leucocephala составила 23,1±0,75 мм при концентрации 200 г/л. Зона ингибирования роста K. pneumoniae составила 6,33±0,51 мм при концентрации 12,5 г/л. Анализ химического состава экстракта Leucaena leucocephala, проведенный с помощью ГХ-МС, показал высокую концентрацию органических компонентов, обладающих антимикробными и антиоксидантными свойствами.

Заключение. По мере развития биотехнологий расширяются представления о химическом составе лекарственных растений. Усовершенствованные методы исследования позволяют извлекать, фракционировать и идентифицировать широкий спектр биологически активных соединений, каждое из которых имеет свою уникальную химическую структуру и механизм действия. Проведенное перспективное исследование показало, что растительный экстракт Leucaena leucocephala обладает противомикробными и антиоксидантными свойствами, что позволяет рассматривать его в качестве одного из потенциальных средств альтернативной медицины.

Введение. Наследственные нарушения обмена пуринов и пиримидинов представляют собой гетерогенную группу заболеваний, активно изучаемых в последнее время. Поэтому разработка новых алгоритмов биохимической и молекулярно-генетической диагностики данной патологии представляется чрезвычайно актуальной.

Цель. Определить значимость использования технологий хроматографии-массспектрометрии и молекулярно-генетического анализа в диагностике наследственных нарушений обмена пуринов и пиримидинов у детей.

Материалы и методы. C использованием хромато-масс-спектрометрического и молекулярно-генетического анализа исследован уровень ключевых метаболитов обмена нуклеотидов в моче у 137 детей. Среди них 72 пациента с подозрением на наследственные нарушения обмена пуринов и пиримидинов (по результатам выполнения традиционного клинико-лабораторного исследования), 35 детей с подозрением на нарушение обмена аминокислот и органических кислот, составивших группу сравнения, а также 30 детей контрольной группы.

Результаты. Среди 72 детей с подозрением на нарушение обмена пуринов и пиримидинов выявлено 18 пациентов с различными формами наследственно обусловленной патологии. Биологический материал 3 пациентов с установленным синдромом Леша – Нихана был подвергнут таргетному секвенированию гена HPRT1 методом NGS. При этом обнаружены мутации p. G16V (c.47G>T), p. R48H (c.143G>A) и p. L49R (c.146T>G).

Заключение. Результаты выполненной работы обосновывают высокую диагностическую значимость сочетанного использования методов аналитической химии (состоящих в использовании технологии хромато-масс-спектрометрического анализа) и молекулярно-генетического исследования для установления наследственно обусловленных нарушений обмена пуринов и пиримидинов. Показано, что определение в моче содержания пуринов и пиримидинов может рассматриваться как перспективный методологический аспект клинико-лабораторной диагностики отдельных наследственно обусловленных нарушений обмена. В качестве подтверждения диагноза рекомендовано использовать молекулярно-генетический анализ генов, включающий технологию таргетного NGS-секвенирования.

Введение. Цитогенетический метод исследования является одним из ключевых в диагностике острых лимфобластных лейкозов. Помимо специфических транслокаций, включенных в классификацию ВОЗ, анализ кариотипа позволяет выявить дополнительные хромосомные аберрации и их сочетания. Установление особенностей природы цитогенетических изменений в лейкемических клетках составляет фундаментальную основу поиска клинико-лабораторных маркеров риск-стратификации пациентов детского и более старшего возраста с первичным острым лимфобластным лейкозом из В-клеток-предшественников.

Цель. Определить особенности спектра и частоту встречаемости цитогенетических изменений в лейкемических клетках пациентов детского, подросткового и молодого взрослого возраста с острым лимфобластным лейкозом из В-клетокпредшественников. Материалы и методы. Проанализированы образцы лейкемических клеток 1002 пациентов с первичным острым лимфобластным лейкозом из В-клетокпредшественников. В исследование вошли пациенты от 0 до 29 лет (медиана – 4,68), соотношение по полу составило мальчик: девочка 1,15:1. Анализ хромосомных перестроек проводился методами стандартного цитогенетического исследования и флуоресцентной in situ гибридизации. Определение специфических химерных генов осуществлялось методом ПЦР.

Результаты. Проанализирована структура кариотипа всех первичных острых лимфобластных лейкозов из В-клеток-предшественников (модальное число, дополнительные хромосомные аберрации, дисбаланс) среди подгрупп пациентов со специфическими хромосомными перестройками (t(1;19), t(12;21), t(9;22) и t(11; v)/ KMT2A(+)) и группы B-other.

Заключение. Выявлены паттерны характерных для разных подгрупп дополнительных хромосомных аберраций. Установлено, что частота встречаемости псевдодиплоидного кариотипа выше, а кариотипа с высокой гипердиплоидией – ниже во всех подгруппах со специфическими транслокациями в сравнении с группой B-other. Наивысший уровень нестабильности кариотипа выявлен в подгруппе с t(12;21), а самый низкий – при KMT2A(+). Показано, что имеются различия в структуре цитогенетических изменений в разновозрастных группах: так, неблагоприятные кариотипы KMT2A(+), t(9;22) с низкой гипердиплоидией встречаются чаще у молодых взрослых, чем у детей и подростков, а частота встречаемости благоприятных кариотипов с t(12;21) и высокой гипердиплоидией – ниже.

Введение. К предикторам тромботических осложнений хронических миелопролиферативных новообразований (ХМПН), нередко приводящих к летальным исходам, могут относиться как клинические особенности течения основного заболевания, так и факторы, связанные с патогенезом приобретенной или наследственной формы тромбофилии.

Цель. Выявить частоту встречаемости мутаций генов гемостаза у пациентов с ХМПН, имеющих тромботические осложнения.

Материалы и методы. Научное исследование проведено на базе Республиканского специализированного научно-практического медицинского центра (РСНПМЦ) гематологии в ходе обследования 183 пациентов, 142 из которых состояли на учете с диагнозом «Хронические миелопролиферативные новообразования», с учетом наличия (n=50) либо отсутствия (n=92) эпизодов тромбоза. Были проведены исследования мутаций генов факторов свертывания крови: G(455)A гена FGB, G20210A гена F2, G10976A (Arg353Gln) гена F7, G1691A (Arg506Gln) гена F5 – в когорте пациентов с ХМПН.

Результаты. Вариантный ген F7 (G10976A) встречался в 3 раза чаще (OR=3,25), а FGB (G(455)A) – в 8 раз чаще (OR=8,19) в группе пациентов с ХМПН, чем у практически здоровых людей контрольной группы. Однако статистический анализ показал достоверные различия частоты встречаемости вариантных отклонений лишь в отношении мутационного гена FGB (p<0,001).

Введение. Развитие инфекции в ожоговых ранах во многом определяется бактериями, устойчивыми к антибактериальным препаратам. К таковым, в частности, относятся Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae и Pseudomonas aeruginosa.

Цель. Поиск альтернативных методов лечения, основанных на использовании антибактериальных и антиоксидантных свойств флавоноидов растительного происхождения.

Материалы и методы. Приготовление in vitro метанольного экстракта R. damascena методом мацерации в концентрациях от 70 мг/мл (г/л) до 300 мг/мл (г/л). Использование технологии высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для идентификации флавоноидов лепестков Rosa damascena. Получение культур микроорганизмов Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae и Pseudomonas aeruginosa. Оценка проявления экстрактом лепестков Rosa damascena антибактериальных и антиоксидантных свойств.

Результаты. Показано, что экстракт из лепестков розы проявлял высокую антибактериальную активность в отношении грамположительных микроорганизмов, причем наибольший эффект наблюдался в отношении S. aureus (26,6 мм). Экстракт исследовали в различных концентрациях: 200, 100, 50, 25 и 12,5 мг/мл (г/л). Был осуществлен качественный анализ его химического состава методом ВЭЖХ, который показал высокое содержание в экстракте флаванолов и фенольных кислот. Оценка антиоксидантной активности проводилась с помощью тестов на «вымывание» свободных радикалов, в частности, по методу DPPH. Полученные данные свидетельствуют о том, что лепестки R. damascena могут использоваться в медицинской практике в качестве источника биологически активных соединений, проявляющих как антибактериальные, так и антиоксидантные свойства. Сочетанное их проявление является фактором, существенно повышающим эффективность медицинского применения экстракта растительного происхождения.

Заключение. Экстракты лепестков Rosa damascena содержат значительное количество фитохимических биологически активных соединений, обладающих антибактериальными и антиоксидантными свойствами, что делает их сопоставимыми с синтетическими антибактериальными препаратами и аскорбиновой кислотой (как антиоксидантом).

Введение. Около 150 миллионов человек ежегодно страдают от инфекций мочевыводящих путей (ИМП), основной причиной которых является уропатогенная Escherichia coli. По распространенности ИМП уступают только инфекциям дыхательных путей. Для E. coli характерна множественная лекарственная устойчивость (МЛУ), что объясняется наличием у них генов эффлюксных насосов.

Цель. Проведение оценки частоты встречаемости генов эффлюксных насосов acrA, acrB и tolC в штаммах кишечной палочки (UPEC), выделенных от пациентов с сахарным диабетом, проходивших лечение в учебном госпитале Аль-Хусейн.

Материалы и методы. Из 100 образцов мочи, взятых у пациентов с сахарным диабетом, было выделено 20 штаммов E. coli. Все они были диагностированы с использованием методов биохимического и молекулярно-биологического анализа на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). В соответствии с рекомендациями Института клинических лабораторных стандартов (CLSI) для определения чувствительности к противомикробным препаратам использовали метод дисковой диффузии.

Результаты. Среди всех выделенных изолятов 18 (90%) проявили высокую устойчивость к амикацину, 17 (85%) – к цефтриаксону, 17 (85%) – к пиперациллину, 15 (75%) – к ципрофлоксацину, 13 (65%) – к триметоприму и 9 (45%) – к азтреонаму; чувствительность к меропенему была самой высокой у 4 изолятов (20%). 18 (90%) изолятов обладали МЛУ. Частота встречаемости гена acrA составила 100% (20 изолятов), гена acrB – 95% (19 изолятов), гена tolC – 85% (17 изолятов).

Заключение. Меропенем и азтронам являются наиболее эффективными антибактериальными препаратами для лечения инфекций, вызванных E. coli, у пациентов с сахарным диабетом с генами эффлюксных насосов. Результаты проведенного исследования подтверждают концепцию о том, что гены эффлюксных насосов acrA, acrB и tolC играют существенную роль в устойчивости уропатогенной кишечной палочки к различным антибактериальным препаратам, что обусловливает необходимость применения новых методов лечения пациентов с сахарным диабетом и инфекциями мочевыводящих путей.

Введение. Грамотрицательный условно-патогенный микроорганизм Pseudomonas aeruginosa является возбудителем нозокомиальных инфекций, в том числе в местах ожогов и хирургических вмешательств. Ожоги и раны нарушают естественную защиту кожи, что способствует более активной колонизации P. aeruginosa и вызывает инфекцию вследствие сочетанного воздействия матричных белков и возбудителей воспалительных процессов.

Цель. Провести отбор и генетический анализ изолятов P. aeruginosa, полученных из различных образцов кожи (с ожогами и ранами) пациентов с ослабленным иммунитетом, пребывавших в реанимационных отделениях больниц мухафазы Насирия.

Материалы и методы. Для исследования было отобрано 113 образцов тканей пациентов с ожогами и хирургическими ранами. С использованием стандартных методов биохимического и молекулярно-биологического определения факторов вирулентности установлено, что 26 изолятов являются положительными на P. aeruginosa. Одновременно проводили мониторинг генов вирулентности (OprL, ToxA и LasR) и генов резистентности к противомикробным препаратам (Blavim-2, Blakpc и MexB) для идентификации отдельных штаммов бактерий.

Результаты. По результатам ПЦР-теста было установлено наличие генов OprL и ToxA (84,62% образцов), гена LasR (88,46%) и гена MexB (80,77%). Вместе с тем гены blaKPC и blaVIM2 не были обнаружены. Результаты секвенирования 16S рДНК десяти специально отобранных изолятов были отправлены в компанию Macrogen (Корея) для выявления 100%-ного сходства с другими родственными штаммами на основании данных сайта Национального центра биотехнической информации (NCBI) с помощью программы BLAST. Эти изоляты были зарегистрированы в Генном банке под идентификационными номерами LC816373, LC816374, LC816375, LC816376, LC816377, LC816378, LC816379, LC816380, LC816381 и LC816382.

Заключение. Результаты выполненного исследования показали наличие генов OprL, ToxA, LasR и MexB.

Цель. Изучить распространенность и спектр маркеров резистентности к макролидам в изолятах Mycoplasma genitalium, выделенных от пациентов из областных центров Республики Беларусь, обратившихся за медицинской помощью в лечебно-профилактические учреждения за период с марта 2022 по март 2024 года.

Материалы и методы. 322 образца ДНК Mycoplasma genitalium из трех областных центров (Брест, Витебск, Минск) Республики Беларусь исследовали на наличие маркеров резистентности к макролидам с помощью разработанной технологии полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, которая позволяет выявлять любые нуклеотидные замены в гене 23S pPHK M. genitalium в позициях 2058, 2059, 2611 (согласно нумерации E. coli). Для подтверждения характера нуклеотидных замен все образцы, несущие мутации, были дополнительно исследованы методом секвенирования по Сэнгеру.

Результаты. За период с марта 2022 по март 2024 года по Республике Беларусь частота распространения мутаций резистентности к макролидам у M. genitalium составила 15,22% (49/322). Мутационный профиль представлен 2 вариантами нуклеотидных замен V домена 23S pPHK M. genitalium: позиция A2059G – 10,25% (33/322) и A2058G – 4,97% (16/322). Распространенность макролидорезистентности и мутационный профиль у M. genitalium по областным городам Беларуси составили: Минск – 20,6% (41/199) с мутациями в позициях A2059G – 14,57% (29/199) и A2058G – 6% (12/199); Брест – 5% (5/90) с мутациями в позициях A2059G – 4% (4/90) и A2058G – 1% (1/90); Витебск – 9% (3/33) с мутациями в позициях A2058G – 6% (2/33) и A2059G – 3% (1/33). Количество выявленных мутаций в позиции A2059G преобладает над A2058G в два раза. Такое количественное соотношение между выявленными генетическими детерминантами макролидорезистентности (A2059G и A2058G) характерно как для отдельных областных центров, так и для республики в целом. Распространенность маркеров резистентности к макролидам у M. genitalium в различных гендерных группах составила: в женской популяции – 15,56% (35/225), в мужской популяции – 14,43% (14/97). Различий в мутационном спектре у M. genitalium, выделенной от женщин и мужчин, не выявлено. В обеих группах преобладает один и тот же вариант в позиции A2059G. Результаты депонированы и импортированы на онлайн-платформу для анализа и обмена данными антибиотикорезистентности AMRcloud (https:// amrcloud. net/ru/project/demares/).

Заключение. Полученные в рамках выполнения в России многоцентрового проекта DeMaRes (Detection of Macrolide Resistance – Mycoplasma genitalium) данные являются первыми результатами, демонстрирующими актуальность проблемы антибиотикорезистентности у M. genitalium для Республики Беларусь. Обнаруженные мутации подчеркивают необходимость внедрения методов молекулярной диагностики (ПЦР) в практику рутинного тестирования всех M. genitalium-положительных образцов на наличие мутаций устойчивости к макролидам.

Наблюдается рост заболеваемости коклюшем среди взрослого населения, особенно заметный после пандемии COVID-19, когда в начале 2024 г. зарегистрировано значительное увеличение числа случаев заболевания в США, Европе и России. В статье обсуждается эффективность вакцин против коклюша у взрослых с акцентом на особенности иммунного ответа и значимость ревакцинации. Отмечается, что бесклеточные вакцины обеспечивают высокий уровень иммунитета со значительным увеличением титров антител Immunoglobulin G и Immunoglobulin A. Ревакцинация у взрослых характеризуется существенным повышением уровней антител и обеспечением длительной защиты от коклюша, несмотря на более высокую частоту местных побочных эффектов по сравнению с цельноклеточными вакцинами. Осуществлен анализ эффективности вакцинации беременных женщин бесклеточными вакцинами в третьем триместре беременности, отмечена важность ревакцинации женщин данной группы риска. Вакцинация против коклюша у взрослых является эффективным методом предотвращения распространения заболевания, однако требуются стандартизация протоколов вакцинации и проведение дополнительных исследований для оптимизации стратегий ревакцинации.