Статус: по данным на 08.09.2010 - может прекратить свое действие
(21), (22) Заявка: 2006124856/04, 09.12.2004
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 09.12.2004
(30) Конвенционный приоритет: 12.12.2003 EP 03104662.6 12.12.2003 US 60/528,701
(43) Дата публикации заявки: 20.01.2008
(46) Опубликовано: 10.04.2009
(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске:
US 2001/041711 А1, 15.11.2001. US 2003/109539 A1, 12.06.2003. WO 01/07050 A, 25.05.2001. JP 2000169476 A, 20.06.2000. EP 0997464 A, 03.05.2000. RU 2002101935 A, 10.08.2003.
(85) Дата перевода заявки PCT на национальную фазу: 12.07.2006
(86) Заявка PCT: EP 2004/053373 20041209
(87) Публикация PCT: WO 2005/058890 20050630
Адрес для переписки: 129090, Москва, ул. Б.Спасская, 25, стр.3, ООО "Юридическая фирма Городисский и Партнеры", пат.пов. Е.Е.Назиной, рег. 517
(72) Автор(ы): МЕНТЦЕЛЬ Маттиас (DE), РАЙХЕ Даниа Б. (DE), БРУКНЕР Райнхард (DE), ДЭВИД Сэмюэль (DE), ВАН СТЕН Бартоломеус Й. (NL), ШОН Уве (DE), ЖАССЕРАН Даниэль (DE), ПРОЙШОФФ Ульф (DE)
(54) ГИДРОНОПОЛЬНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ В КАЧЕСТВЕ АГОНИСТОВ ПО ОТНОШЕНИЮ К ORL1 РЕЦЕПТОРАМ ЧЕЛОВЕКА
(57) Реферат:
Изобретение относится к новым соединениям общей формулы (1)
в которой: R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, (1-3С)алкоксигруппу, m является целым числом от 1 до 4, при условии, что, когда m равно 2, 3 или 4, заместители R1 могут быть или одинаковыми или различными, R2 представляет собой атом водорода, алкильную (1-6С) группу, необязательно замещенную алкоксигруппой, циклоалкильную (3-6С) группу, -СН2ОН, -СН2ОСН3, ацетильную группу, бензильную группу, необязательно замещенную аминогруппой, или группу Q следующей структуры (2):
в которой: []n символически изображает -(СН2)n-, где n является целым числом от 0 до 7, R3 представляет собой атом водорода или алкильную (1-3С) группу, R4 представляет собой атом водорода, алкильную (1-6С) группу, необязательно замещенную одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, насыщенное, ненасыщенное или частично насыщенное моно- или дициклическое 5-10-членное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, или алкильную (1-3С) группу, замещенную насыщенным, ненасыщенным или частично насыщенным пяти- или шестичленным кольцом, которое необязательно содержит один или более гетероатомов, таких как атом азота, атом кислорода или атом серы, необязательно замещенным одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, или (R3+R4) вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют собой насыщенное, ненасыщенное или частично насыщенное моно- или дициклическое пяти- или шестичленное кольцо, которое необязательно содержит один или более гетероатомов, таких как атом азота, атом кислорода или атом серы, необязательно замещенным одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, и ко всем стереоизомерам, а также к фармакологически приемлемым солям. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям и к применению соединений. Технический результат - получение новых биологически активных соединений, проявляющих агонистическую активность к ORL1 рецепторам. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 табл.
Настоящее изобретение относится к группе гидронопольных производных, которые являются агонистами (веществами, обладающими сродством) к ORL1 (ноцицептиновым) рецепторам человека. Изобретение также относится к получению этих соединений, к фармацевтическим композициям, содержащим фармакологически активное количество, по меньшей мере, одного из этих новых производных гидронопола в качестве активного ингредиента, а также к применению этих фармацевтических композиций для лечения расстройств, связанных с ORL1 рецепторами.
Opioid Receptor-Like 1 (ORL1) рецептор идентифицировали из библиотеки кДНК человека. Было установлено, что этот 'сиротский рецептор' имеет близкую гомологию с µ-, - и -опиоидными рецепторами (Mollereau et al., FEBS Lett., 341, 33-38, 1994; Bunzow et al., FEBS Lett., 347, 284-288, 1994). Несмотря на близкое сходство его последовательности и структурное сходство с опиоидными рецепторами классические лиганды опиоидного рецептора не взаимодействуют с ORL1 рецепторами. В 1995 г. 17-аминокислотный нейропептид выделили из экстрактов (вытяжки) мозга и впоследствии показали, что он является природным лигандом G-протеин-связанного ORL1 рецептора (Reinscheid et al., Science, 270, 792-794, 1995; Meunier et al., Nature, 377, 532-535, 1995). Пептид назвали сиротой FQ или ноцицептином, и он не присоединяется к трем традиционным опиоидным рецепторам. Эти открытия дали начало фундаментальному исследованию функциональной роли ORL1 рецептора и новых лигандов для ORL1 рецептора. Это привело к нескольким сотням публикаций, включая несколько обзоров (смотри, например, Grond et al., Anaesthesist, 51, 996-1005, 2002), и к десяткам патентных заявок, описывающих как пептидные, так и непептидные лиганды, варьированные по силе и селективности (ORL-1 в сравнении с µ-опиатом). Поскольку рецепторы µ-опиата широко распределяются по всему телу, отсутствие селективности может привести к ряду нежелательных опиатоподобных побочных эффектов, например к седации, угнетению дыхания, запору, привыканию и зависимости (Drug News Perspect, 14, 335, 2001).
Производные 1,3,8-триазаспиро[4,5]декан-4-она описаны в патентной заявке JP-A-2000/169476, опубликованной 20 июня 2000 г.; в патентной заявке WO 01/07050 A1, опубликованной 1 февраля 2001 г., и в патентной заявке US 2003/0109539 A1, опубликованной 12 июня 2003 г. Однако ни в одной из заявок, приведенных выше, не указаны рецепторы µ-опиата. В патентной заявке EP 0 997 464 A1, опубликованной 3 мая 2000 г., указывают, что соединения 1,3,8-триазаспиро[4,5]деканона в качестве агонистов ORL1 рецептора обладают селективным сродством к ORL1 рецепторам, но конкретная информация о сродстве рецептора µ-опиата была ограничена утверждением того, что: «особенно предпочтительные соединения показали большее сродство к ORL-1 рецепторам, чем к мю-рецепторам (то есть, IC50 для ORL1-рецепторов/IC50 для мю-рецепторов были меньше, чем 1,0)». Более конкретной является патентная заявка US 2001/0041711, опубликованная 15 ноября 2001г. Эта патентная заявка описывает триазоспиро-соединения, имеющие сродство к рецептору ноцицептина. Соединения также были испытаны на рецепторах µ-, - и -опиата, но только за несколькими исключениями обнаружено, что они являются более сильнодействующими по отношению к рецепторам µ-опиата, чем к ORL1 рецепторам. Исключения были селективны по отношению к ORL1 рецепторам менее чем в два раза. Таким образом, ближайший известный уровень техники (прототип) не указывает, как создавать сильнодействующие (эффективные) ORL1 лиганды с точно выраженной селективностью по сравнению с рецепторами µ-опиата, то есть с селективностью, имеющей показатель, по меньшей мере, 10, не говоря уже о таких соединениях, которые также имеют хорошее бионакопление. Наконец, производные 1,3,8-триазаспиро[4,5]декан-4-она, замещенные гидроксиалкилом, полезные для лечения расстройств, опосредуемых (обусловленных) ORL1 рецептором, были опубликованы 18 марта 2004 г. в патентной заявке WO 2004/022558, зарегистрированной 5 сентября 2003г.
Неожиданно обнаружено, что в сериях гидронопольных производных группа соединений, как было показано, имеет очень высокое сродство к рецепторам ORL1 человека. Более того, эти соединения показывают хорошую селективность к рецепторам ORL1 относительно рецепторов µ-опиата и легко усвояемы после орального введения.
Изобретение относится к соединениям общей формулы (1)
в которой:
R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, алкильную (1-6С) группу, циклоалкильную (3-6С) группу, фенильную группу, аминогруппу, алкил(1-3С)аминогруппу, диалкил(1-3С)аминогруппу, гидроксильную группу, гидроксиалкильную (1-3С) группу, (1-3С)алкоксигруппу, OCF3, карбоксильную группу, аминокарбонильную или (1-3С)алкилсульфонильную группу,
m является целым числом от 1 до 4, при условии, что, когда m равно 2, 3 или 4, заместители R1 могут быть одинаковыми или различными,
R2 представляет собой атом водорода, необязательно замещенную алкильную (1-6С) группу, циклоалкильную (3-6С) группу, -CH2OH, -CH2OCH3, карбоксильную группу, ацетильную группу, необязательно замещенную бензильную группу или группу Q следующей структуры (2):
в которой:
[]n изображает символически -(CH2)n-, где n является целым числом от 0 до 7,
R3 представляет собой атом водорода или алкильную (1-3С) группу,
R4 представляет собой атом водорода, необязательно замещенную алкильную (1-6С) группу, насыщенное, ненасыщенное или частично насыщенное моно-, ди- или трициклическое необязательно замещенное кольцо, или алкильную (1-3С) группу, замещенную насыщенным, ненасыщенным или частично насыщенным необязательно замещенным пяти- или шестичленным кольцом, которое необязательно содержит один или более гетероатомов, или
(R3+R4) вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют собой насыщенное, ненасыщенное или частично насыщенное моно-, ди- или трициклическое необязательно замещенное кольцо,
и к их фармакологически приемлемым солям и пролекарствам.
В описании заместителей аббревиатура 'алкильная (1-3С) группа' означает 'метильная группа, этильная группа, n-пропильная группа или изопропильная группа'. 'Необязательно замещенная' означает, что группа может быть дополнительно замещена или не замещена одной или более группами, выбранными из алкильной группы, алкенильной группы, алкинильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, алкенилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, или два необязательных заместителя вместе с атомами углерода, к которому они присоединены, могут образовывать 5- или 6-членное ароматическое или неароматическое кольцо, содержащее 0, 1 или 2 гетероатома, выбранных из азота, кислорода или серы. В рамках контекста объяснения выражения 'необязательно замещенная', 'алкильная группа' означает С1-3-алкильная группа, 'алкенильная группа' означает С1-3-алкенильная группа, 'алкинильная группа' означает С1-3-алкинильная группа, 'ацильная группа' означает С1-3-ацильная группа и 'арильная группа' означает фурильная группа, тиенильная группа, пирролильная группа, оксазолильная группа, тиазолильная группа, имидазолильная группа, пиразолильная группа, изоксазолильная группа, изотиазолильная группа, пиридильная группа, пиридазинильная группа, пиримидинильная группа, пиразинильная группа, 1,3,5-триазинильная группа, фенильная группа, индазолильная группа, индолильная группа, индолизинильная группа, изоиндолильная группа, бензо[b]фуранильная группа, бензо[b]тиофенильная группа, бензимидазольная группа, бензтиазолильная группа, пуринильная группа, хинолинильная группа, изохинолильная группа, хинолильная группа, фталазинильная группа, хиназолинильная группа, хиноксалинильная группа, 1,8-нафтиридинильная группа, пиридинильная группа, нафтильная группа или азуленильная группа, предпочтительно фенильная группа, пиридильная группа или нафтильная группа. Необязательные заместители сами могут нести дополнительные необязательные заместители. Предпочтительные необязательные заместители включают С1-3-алкильную группу, такую как, например, метильная группа, этильная группа и трифторметильная группа, фтора, хлора, брома, гидроксильную группу, С1-3-алкилоксигруппу, такую как, например, метоксигруппа этоксигруппа и трифторметоксигруппа, и аминогруппу. 'Гетероатом' означает атом, такой как атом азота, атом кислорода или атом серы. 'Пяти- или шестичленные кольца' представляют собой, например: фурановые кольца, тиофеновые кольца, пиррольные кольца, оксазольные кольца, тиазольные кольца, имидазольные кольца, пиразольные кольца, изоксазольные кольца, изотиазольные, 1,2,3-оксадиазольные кольца, 1,2,3-триазольные кольца, 1,3,4-тиадиазольные кольца, пиридиновые кольца, пиридазиновые кольца, пиримидиновые кольца или пиразиновые кольца.
К изобретению относятся все соединения, имеющие формулу (1), рацематы, смеси диастереомеров и выделенные стереоизомеры. Таким образом, соединения, в которых заместители на потециально асимметричных атомах углерода находятся или в R-конфигурации, или в S-конфигурации, относятся к изобретению.
Пролекарства являются терапевтическими средствами (веществами), которые сами по себе являются неактивными, но превращаются в один или более активных метаболитов. Пролекарства являются биообратимыми производными молекул лекарственных веществ, используемыми для преодоления некоторых барьеров к (извлечению) полезности родительской молекулы лекарственного вещества. Эти барьеры включают в себя растворимость, проницаемость, стабильность, пресистематический метаболизм и ограничения по нацеливанию лекарства, но не ограничены этим (Medicinal Chemistry: Principles and Practice, 1994, ISBN 0-85186-494-5, Ed.: F. D. King, p. 215; J. Stella, Prodrugs as therapeutics, Expert Opin. Ther. Patents, 14(3), 277-280, 2004; P. Ettmayer et al., Lessons learned from marketed and investigational prodrugs, J.Med.Chem., 47, 2393-2404, 2004). Пролекарства, то есть соединения, которые при введении в человека любым известным способом подвергаются биотрансформации в соединения, имеющие формулу (1), относятся к изобретению. В частности, это относится к соединениям с первичными или вторичными аминогруппами или гидроксильными группами. Такие соединения могут быть подвергнуты реакции с органическими кислотами, давая соединения, имеющие формулу (1), в которой присутствует дополнительная группа, которая легко удаляется после введения, но которая не ограничивается, например, амидиновой группой, энаминовой группой, основанием Манниха, гидроксилметиленовым производным, O-(ацилоксиметиленкарбамат)-производным, карбаматной группой, сложноэфирной группой, амидогруппой или энаминоновой группой.
В частности изобретение относится к соединениям, имеющим формулу (1), в которой: R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, алкильную (1-6С) группу, гидроксильную группу, (1-3С)алкоксигруппу или OCF3, m=1, и все другие радикалы имеют значения, приведенные выше.
В большей степени изобретение относится к соединениям, имеющим формулу (1), в которой: R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, алкильную (1-6С) группу, гидроксильную группу, (1-3С)алкоксигруппу или OCF3, m=1, R2 представляет собой группу Q, имеющую общую формулу (2), и все другие радикалы имеют значения, приведенные выше.
В еще большей степени изобретение относится к соединениям, имеющим формулу (1), в которой: R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, алкильную (1-6С) группу, гидроксильную группу, (1-3С)алкоксигруппу или группу OCF3, m=1, R2 представляет собой группу Q, имеющую общую формулу (2), R3 представляет собой метильную группу, R4 представляет собой алкильную (1-3С) группу, замещенную насыщенным, необязательно замещенным шестичленным кольцом, которое необязательно содержит один или более гетероатомов, и []n имеет значения, приведенные выше.
Наиболее предпочтительными соединениями изобретения являются соединения, имеющие формулу (1), в которой: R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, алкильную (1-6С) группу, гидроксильную группу, (1-3С)алкоксигруппу или OCF3, m=1, R2 представляет собой группу Q, имеющую общую формулу (2), R3 представляет собой метильную группу, R4 представляет собой метиленовую группу, замещенную необязательно замещенным пиперидиновым кольцом, и []n имеет значения, приведенные выше.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены путем использования стандартных способов, хорошо известных в данной области, например, смешением соединения настоящего изобретения с подходящей кислотой, например, неорганической кислотой, такой как соляная (хлористоводородная) кислота, или с органической кислотой.
Соединения настоящего изобретения общей формулы (1), а также их соли проявляют агонистическую активность к ORL1 рецепторам. Они являются полезными для лечения расстройств, связанных с ORL1 рецепторами, или, которые можно лечить посредством манипулирования этими рецепторами, особенно, но не ограничиваясь этим: состояний острой и хронической боли, нарушений обмена веществ, таких как нервная анорексия и нейрогенная булимия, ожирение; желудочно-кишечных расстройств, в частности, синдрома раздраженной толстой кишки, воспалительной болезни кишечника (гранулематозного энтерита и язвенного колита), поноса, запора, боли в животе, воспаления мочевого тракта, почечных расстройств, характеризующихся нарушениями баланса удержания/выделения воды или выделения соли; расстройств сердечно-сосудистой системы, таких как инфаркт миокарда, аритмия, повышенное кровяное давление, тромбоз, анемия, артериосклероз, стенокардия; офтальмологических расстройств, таких как глаукома; расстройств дыхательной системы, включающих хроническое обструктивное заболевание легких, бронхит и кистозный фиброз; заболеваний иммунной системы и вирусных инфекций.
Агонистические свойства соединений изобретения по отношению к ORL1 рецептору in vitro и in vivo определили, используя методики, приведенные ниже.
Сродство к ORL1 рецепторам человека
Сродство соединений к ORL1 рецепторам человека определили, используя реакцию связывания рецептора in vitro, описанный Ardati et al., Mol. Pharmacol., 51, 816, 1997. Кратко, препараты мембран были получены из клеток CHO (яичника китайского хомяка), в которых ORL1 рецептор человека стабильно выражен. Мембраны выдерживали с [3H]-ноцицептином в отсутствии или в присутствии тестовых соединений в различных концентрациях, разведенных в подходящем буфере. Неспецифическое связывание определили как связывание, остающееся в присутствии 10-6 М ноцицептина. Отделение связанной радиоактивности от свободной осуществили фильтрацией через стекловолоконные фильтры Паккарда GF/B с несколькими промываниями ледяным буфером, используя коллектор клеток Паккарда. Связанную радиоактивность измеряли сцинтилляционным счетчиком (Topcount, Packard), используя жидкий коктейль для сцинтилляционного счета (Microscint 0, Packard). Измеренную радиоактивность наносили на графике в зависимости от концентрации вытесняющего тестового соединения и кривые вытеснения рассчитывали логистической регрессией с четырьмя параметрами, получая в результате значения IC50, то есть значения IC50 для такой концентрации вытесняющего соединения, при которой вытеснено 50% радиолиганда. Значения сродства pK1 вычисляли c учетом поправок значений IC50 для концентрации радиолиганда и его сродства к ORL1 рецептору человека в соответствии с уравнением Ченга-Прусоффа:
pK1=-log(IC50/(1+S/Kd))
в котором IC50 представляет собой то же, что описано выше, S является концентрацией [3H]-ноцицептина, использованной в образце для анализа, выраженной в моль/л (обычно 0,2 нМ), и Kd является равновесной константой диссоциации [3H]-ноцицептина по отношению к ORL1 рецепторам человека (0,4 нМ).
Соединения изобретения имеют высокое сродство к ORL1 рецепторам в реакции связывания, описанной выше. Это свойство делает их полезными в лечении расстройств, связанных с ORL1 рецепторами, или которые можно лечить посредством манипулирования этими рецепторами.
Сродство к µ-опиатным рецепторам
Сродство соединений к µ-опиатным рецепторам определяли, используя реакцию связывания рецептора in vitro, описанную Wang et al., FEBS Letters, 338, 217, 1994. Кратко, препараты мембран получали из клеток CHO (яичника китайского хомяка), в которых µ-опиатный рецептор человека стабильно выражен, и выдерживали со специфическим лигандом µ-опиата [3H]-DAMGO (D-Ala2, N-Me-Phe4, глицинол5-Энкефалин) в отсутствии или в присутствии тестовых соединений в различных концентрациях, разведенных в подходящем буфере. Неспецифическое связывание определяли как связывание, остающееся в присутствии 10-6 М налоксона. Отделение связанной радиоактивности от свободной осуществляли таким же способом, как описано выше, и сродство соединений вычисляли подобным образом.
Соединения изобретения имеют низкое сродство к µ-опиатным рецепторам в реакции связывания, описанной выше. Таким образом, маловероятно, что они индуцируют нежелательные побочные эффекты, которые, как известно, имеют место с опиатами, такими как морфин.
Агонизм ORL1 рецептора in vitro
Активация G-протеин-связанного ORL1 рецептора ингибирует активность аденилатциклазы и снижает внутриклеточную концентрацию вторичного посланника (мессенджера) - циклоаденозинмонофосфата (cAMP). Активность соединений по отношению к ORL1 рецепторам измеряли, используя методику анализа, описанную Jenck et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 4938-4943, 2000. Показано, что они являются сильнодействующими (эффективными) агонистами со значениями pEC50, соответствующими значениям их pKi.
Диарея, вызванная касторовым маслом, у мышей, находящихся в сознании
Показано, что пока есть пептид ноцицептин после подкожного введения, то соединения изобретения могут снижать диарею, вызванную касторовым маслом, у мышей. Поскольку периферически введенный пептид не проникает через гематоэнцефалический барьер указано, что снижение диареи, обусловленное ORL1, является периферически обусловленным.
Используемые животные: для этой модели диареи, вызванной касторовым маслом, использовали самцов мышей NMRI (Naval Medical Research Institute). Во всех экспериментах группа состояла из 10-12 животных.
Экспериментальные методики: в день эксперимента мыши получали или соединение, или носитель (с двухнедельными интервалами). По истечении 30 минут вводили орально касторовое масло (8 мл/кг массы тела) и животных помещали отдельно в клетках со свободным доступом к воде. Фекалии собирали по истечении 5 часов. В течение этого периода времени каждые 20 минут определяли визуальным осмотром качество фекалий. Бальная оценка диареи колебалась в диапазоне от 0 до 4, 0=нет выброса, 1=нормальный выброс (масса), 2=слабая диарея, 3=умеренная диарея, 4=сильная диарея. Таким образом, эта оценка по баллам отражает начало проявления и интенсивность диареи. В этих экспериментах определяли средний балл диареи и сухой вес фекалий.
Анализ данных: действие соединений приведено в виде относительных чисел (процент от контрольных значений). Исходные данные, регистрируемые в экспериментах, сравнивали с контрольными данными (без соединения) для одних и тех же животных посредством парных двусторонних критериев Стьюдента (t-tests) или с контрольной группой посредством непарного критерия Стьюдента (t-test). Значения p<0,05 принимали как статистически значимые.
Толстокишечный транзит (транзит по толстой кишке) у крыс, находящихся в сознании
Показано, что соединения изобретения не оказывают влияния на нормальный (регулярный) транзит по толстой кишке у крыс. Это также имело место в случае для пептида (Ноцицептина) после подкожного введения. Поскольку периферически введенный пептид не проникает через гематоэнцефалический барьер указано, что периферическая активация ORL1 рецептора не ухудшает нормальный желудочно-кишечный транзит. Напротив, периферическая активация µ-опиатного рецептора может сильно ухудшить транзит в этой модели. Таким образом, это исследование показывает селективность соединений изобретения по отношению к ORL1 рецептору.
Используемые животные: для экспериментов использовали самцов крыс Sprague Dawley. Во всех экспериментах группа состояла из 10-12 животных.
Экспериментальные методики: до проведения экспериментов крысам сделали постоянный титановый свищ слепой кишки под общей анестезией. Животным дали возможность восстановиться после хирургического вмешательства и приучили к кормлению в режиме свободного доступа для осуществления процесса поглощения еды в течение 3 часов в день. В день экспериментов после периода кормления через свищ в слепую кишку вводили вещество-маркер (2 мл суспензии, содержащей 80% сульфата бария) и животные получали или соединение, или носитель. Позже их помещали в метаболические клетки и собирали фекальные пеллеты ежечасно в течение 21 часа, используя автоматическую систему для сбора. В течение этого периода времени животные имели свободный доступ к воде. Содержание сульфата бария в фекалиях анализировали радиографически, а фекалии взвешивали. Зависимость содержания маркера в фекалиях от времени и количество фекалий позволили оценить среднее время удерживания сульфата бария, то есть время толстокишечного транзита. Были определены среднее время удерживания сульфата бария, содержащегося в пеллетах, и общая масса (выброс) фекалий.
Анализ данных: действие соединений приведено в виде относительных чисел (процент от контрольных значений). Исходные данные, регистрируемые в экспериментах, сравнивали с контрольными данными (без соединения) для одних и тех же животных посредством парных двусторонних критериев Стьюдента (t-tests). Значения p<0,05 принимали как статистически значимые. В модели толстокишечного транзита контрольные данные представляют собой среднее значение из двух контрольных экспериментов (до и после введения соединения, с недельными интервалами).
Висцеральная гиперчувствительность, вызванная уксусной кислотой, у крыс, находящихся в сознании
Показано, что соединения изобретения могут снижать висцеральную гиперчувствительность у крыс, пока имеется в наличии пептид Ноцицептин после подкожного введения. Поскольку периферически введенный пептид не проникает через гематоэнцефалический барьер указано, что снижение висцеральной гиперчувствительности, обусловленное ORL1, периферически обусловлено.
Используемые животные: взрослые самки крыс Sprague Dawley, вес тела: в диапазоне от 200 до 250 г. Группа состоит из 5-10 животных.
Экспериментальная методика: до проведения экспериментов животных подвергли голоданию в течение 24 часов со свободным доступом к воде. В толстую кишку (на 10 см, проксимальные к анальному отверстию) ввели уксусную кислоту (0,6%, 1,5 мл). По истечении 50 минут в дистальную толстую кишку ректально ввели резиновый шарик длиной 5 см (объемом 6-7 мл ) и закрепили путем связывания лентой с трубочкой (пробиркой), привязанной к хвосту крысы. Колоректальное растяжение осуществляли путем установления давления в шарике до 100 мбар (104 Па) в течение 10 минут. В течение этого периода времени путем визуального осмотра отслеживали число брюшных сужений (перетяжек). Продолжали эксперименты только на тех животных, которые реагировали на колоректальное растяжение более чем 10-ю брюшными перетяжками. Эти животные получали разовую дозу вещества или носителя и протокол колоректального растяжения повторяли в течение 30, 60, 90 и 120 минут после введения.
Анализ данных: результаты приведены как среднее значение ± статистическое отклонение. Число брюшных перетяжек, возникших в течение 30, 60, 90 и 120 минут после введения вещества или носителя, а также средние значения (30-120 мин) сравнили с предзначениями путем парных двусторонних критериев Стьюдента (t-тестов). Относительное количество брюшных перетяжек (% от предзначений), возникших в течение 30, 60, 90 и 120 минут в случае введения вещества и в случае введения носителя, и относительные средние значения (30-120 мин) для обоих случаев сравнивали между собой путем непарных двусторонних критериев Стьюдента (t-тестов). Значения p<0,05 были приняты как статистически значимые.
Агонизм ORL1 рецептора in vivo: отсутствие проникновения в центральную нервную систему (CNS)
Показано, что большинство соединений изобретения не проявляют активности при воздействии ультразвукового голосового сигнала, вызывающего стресс у взрослых особей (AUV), что описано Van der Poel et al., Psychopharmacology, 97, 147-148, 1989. Это показывает, что соединения не проникают через гематоэнцефалический барьер. В этом анализе пептид ноцицептин также является активным, но для того, чтобы продемонстрировать его действенность, необходимо его вводить непосредственно в мозг (внутримозговой (меж)желудочковой инъекцией).
ПРИМЕРЫ СИНТЕЗОВ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И КОНЕЧНЫХ ПРОДУКТОВ
Трифенилфосфин (116 г, 0,44 моль) растворили в ацетонитриле (1 л) и охладили в ледяной бане в атмосфере N2. По каплям добавили бром (22,5 мл, 0,44 моль). Температуру экзотермической реакции поддерживали ниже 10°С. По завершении добавления ледяную баню удалили и медленно добавили (-)-транс-миртанол (1) (2,686 г, 0,44 моля), растворенный в ацетонитриле (250 мл). По завершении добавления светло-желтый раствор кипятили, используя прибор с насадкой Дина-Старка, в течение 3 часов. Во время реакции растворитель отгоняли в ловушку для воды и затем 20 раз удаляли (приблизительно 200 мл растворителя в итоге). Газохроматографический (GC) анализ показал полную конверсию исходного вещества. Смесь упарили досуха. Сырую (необработанную) смесь очистили на колонке с силикагелем (элюент: дихлорметан/диэтиловый эфир 1/1, объем/объем). Это дало 87,8 г бромида (2) (91%) в виде светло-желтого масла.
Миртанилцианид (3)
Миртанилбромид (2) (87,8 г, 0,41 моль) растворили в диметилформамиде (1 л). Добавили цианид натрия (40 г, 0,81 моль) и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 5 часов. Газохроматографический анализ показал полную конверсию. Смесь разбавили водой (3 л) и экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (TBME, 3× 1,5 л). Органический слой промыли рассолом (насыщенным раствором NaCl), осушили над Na2SO4 и концентрировали досуха. Сырую смесь очистили на колонке с силикагелем (элюент: гептан/дихлорметан, 1/1, объем/объем) и получили 52,4 г (80%) цианида (3) в виде бесцветной жидкости.
Этиловый эфир (сложный) (4)
Этанол (500 мл) охладили на ледяной бане. Добавили по каплям серную кислоту (190 мл). Добавили цианид (3) (52,4 г, 0,32 моля), растворенный в этаноле (100 мл), и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение ночи. Газохроматографический анализ показал полное присоединение. Смесь охладили и добавили воду (1,5 л). Смесь экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (3×1,5 л). Органический слой промыли NaHCO3 (нас. 1 л), осушили над Na2SO4 и концентрировали. Выход: 54,2 г сложного эфира 5 (80%) в виде почти бесцветной жидкости. Сырой продукт (4) использовали в следующей реакции без очистки.
18,1 г (0,12 моля) (+)-транс-миртанола (6) добавили к раствору 18,5 мл мезилхлорида (2 экв., 0,24 моль, 27,5 г) и 49 мл пиридина (5 экв., 0,60 моля, 47,5 г) в 400 мл дихлорметана (DCM). Реакционную смесь перемешивали всю ночь при комнатной температуре. Добавили воду и реакционную смесь перемешивали в течение одного часа. Органический слой экстрагировали и водный слой экстрагировали еще два раза. Объединенные органические слои промыли (насыщенным NaHCO3, водой, рассолом (насыщенным раствором NaCl)), высушили (Na2SO4) и упарили в вакууме с получением 25,9 г (91%) мезилата (7) в виде бесцветного масла.
Миртанилцианид (8)
Миртанилмезилат (7) (25,9 г, 0,11 моля) растворили в диметилсульфоксиде (DMSO) (250 мл). Добавили цианид калия (4 экв., 29,2 г, 0,45 моля) и смесь перемешивали при 70°С в течение 2 дней. Газохроматографический анализ показал полную конверсию. Смесь разбавили водой (750 мл) и экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (3×300 мл). Органический слой промыли рассолом, высушили над Na2SO4 и концентрировали досуха, что дало 17,7 г (количественный выход) цианида (8) в виде бесцветного масла.
Этиловый эфир (сложный) (9)
Этанол (200 мл) охладили на ледяной бане. По каплям добавили серную кислоту (80 мл). Добавили цианид (8) (17,7 г, 0,11 моля), растворенный в этаноле (40 мл), и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение всей ночи. Газохроматографический анализ показал полное присоединение. Смесь охладили и добавили воду (1 л). Смесь экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (3×500 мл). Органический слой промыли NaHCO3 (нас., 500 мл), высушили над Na2SO4 и концентрировали. Выход: 20,4 г сложного эфира (9) (88%) в виде желтого масла. Сырой продукт (9) использовали в следующей реакции без очистки.
(+)-транс-Дигидронопол (10)
К суспензии литийалюмогидрида (7,4 г, 0,19 моля) в тетрагидрофуране (350 мл) добавили сложный эфир (9) (20,1 г, 0,09 моля), растворенный в тетрагидрофуране (200 мл). По завершении добавления смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов. Смесь охладили на ледяной бане и осторожно добавили соляную кислоту (1М, 1 л). По завершении добавления смесь разбавили водой (300 мл) и экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (3×500 мл). Органический слой промыли рассолом, осушили над Na2SO4 и концентрировали досуха. Сырую смесь подвергли очистке перегонкой Кугельрота (температура кипения 85°С, 8·10-2 миллибар (8 Па)). Выход: 9,2 г соединения (10) (61%) в виде бесцветного масла.
Синтез цис-аналога: (+)-цис-2-(6,6-диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этанола (18), с (-)--пиненом в качестве исходного вещества описан в J. Amer. Chem. Soc. 68, 638, 1946, и в патентах US 2,427,343, 2,427,344 и 2,427,345.
(+)--пинен (13)
В сухой стеклянной посуде трет-бутилоксид калия (KOt-Bu, 49,4 г, 0,44 моля) добавили к n-бутиллитию (176 мл, 2,5М в гексане). Суспензию охладили до -78°С. По каплям добавили (+)--пинен (12) (50 г, 0,37 моля). Реакционной смеси дали нагреться до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 45 часов. Реакционную смесь охладили до -78°С и по каплям добавили B(OMe)3 (137 мл, 1,20 моля). Реакционной смеси дали нагреться до комнатной температуры (экзотермическая реакция!). По каплям добавили 10% HCl (водный, 250 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа. Слои разделили и водный слой экстрагировали гептаном (2×200 мл). Объединенные органические слои высушили над Na2SO4 и упарили досуха, что дало 36,7 г желтого масла. Сырой продукт подвергли очистке, используя перегонку Кугельрота (8-12 мбар (800-1200 Па), 50-60°С), что дало 36,6 г (0,27 моля, выход=73%, 88% чистоты) (+)--пинена (13) в виде бесцветного масла.
Миртанол (14)
(+)--пинен (13) (36,6 г,0,27 моля) растворили в тетрагидрофуране (100 мл) и охладили до 0°С. По каплям добавили BH3·диметилсульфид (BH3·DMS) в тетрагидрофуране (2 М, 47,3 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение получаса. Добавили этанол (90 мл). Добавили 1 М NaOH (вод.) (95 мл). Реакционную смесь охладили до 0°С. По каплям добавили 33 мл 30% H2O2, при этом температуре не давали подниматься выше 35°С. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 часа и вылили в воду (1 л). Раствор экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром. Объединенные органические слои промыли водой и рассолом, осушили над Na2SO4 и упарили досуха. Остающийся -пинен отогнали, используя перегонку Кугельрота (8-9 мбар (800-900 Па), 50-60°С), получая 38,6 г (0,25 моля, выход=93%) (+)-цис-миртанола (14) в виде бесцветного масла.
Миртанилмезилат (15)
15,0 г (0,10 моля) (+)-цис-миртанола (14) добавили к раствору 15 мл мезилхлорида (экв., 0,20 моля) и 40 мл пиридина (5 экв., 0,50 моля) в 300 мл дихлорметана (DCM). Реакционную смесь перемешивали всю ночь при комнатной температуре. Добавили воду и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа. Органический слой экстрагировали и водный слой экстрагировали еще два раза. Объединенные органические слои промыли (насыщенным NaHCO3, водой, рассолом), осушили (Na2SO4) и упарили в вакууме с получением 21,6 г (выход=93%) мезилата (15) в виде бесцветного масла.
Миртанилцианид (16)
Миртанил мезилат (15) (21,6 г, 0,093 моля) растворили в диметилсульфоксиде (DMSO) (230 мл). Добавили цианид калия (4 экв., 24,2 г, 0,37 моля) и смесь перемешивали при 70°С в течение 8 дней. Газохроматографичекий анализ показал полную конверсию. Смесь разбавили водой и экстрагировали гептаном. Органический слой промыли рассолом, высушили над Na2SO4 и концентрировали досуха с получением 15,8 г (количественный выход) цианида (16) в виде бесцветного масла.
Этиловый эфир (сложный) (17)
Этанол (150 мл) охладили на ледяной бане. По каплям добавили серную кислоту (60 мл). Добавили цианид (16) (16 г), растворенный в этаноле (30 мл), и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником всю ночь. Газохроматографичекий анализ показал полную конверсию. Смесь охладили и добавили воду (1 л). Смесь экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (3×500 мл). Органический слой промыли насыщенным NaHCO3 (водный, 500 мл), высушили над Na2SO4 и концентрировали досуха. Выход: 20,6 г сложного эфира (17) (количественный выход) в виде желтого масла. Сырой продукт (17) использовали в следующей реакции без очистки.
(+)-цис-Дигидронопол (18)
К суспензии литийалюмогидрида (8,3 г, 0,22 моля) в тетрагидрофуране (400 мл) добавили сложный эфир (17) (23,6 г, 0,11 моля), растворенный в тетрагидрофуране (200 мл). По завершении добавления смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов. Смесь охладили на ледяной бане и осторожно добавили соляную кислоту (1М, 1 л). По завершении добавления смесь разбавили водой (300 мл) и экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром (3×500 мл). Органический слой промыли рассолом, осушили над Na2SO4 и концентрировали досуха, получая желтое масло (13,4 г). Сырую смесь подвергли очистке перегонкой Кугельрота (температура кипения 85°С, 8·10-2 мбар (8 Па)). Выход: 8,7 г соединения (18) (51 ммоль, y=47%) в виде бесцветного масла.
1-Мезил-2-(6,6-диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этанол (20) (для всех стереоизомеров дигидронопола)
К суспензии 67 г (0,4 моля) (-)-цис-2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этанола (19) в 300 мл дихлорметана при 0°С добавили 139 мл (1 моль) триэтиламина. К этой смеси добавили по каплям 55,2 г (0,48 моля) мезилхлорида в 100 мл дихлорметана. По истечении 5 часов при комнатной температуре реакция была завершена, и были добавлены 300 мл 1н. водного раствора HCl. После отделения водный слой промыли дихлорметаном дважды и объединенные органические слои промыли водой, осушили над сульфатом магния и концентрировали в вакууме, получая на выходе 91,6 г (0,37 моля, 91%) сырого оранжевого маслянистого продукта. Этот сырой материал использовали для следующей стадии без дополнительной очистки.
Тетрагидрофуран (1500 мл) охладили на водно-ледяной бане. Добавили спиросоединение (22) (150,8 г, 0,40 моля) и трет-бутоксид калия (49 г, 0,44 моля) и получающуюся в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 30 минут. Смесь стала прозрачной. К раствору при 0°С добавили по каплям 1-бром-3-хлорпропан (43 мл, 0,44 моля) в тетрагидрофуране (150 мл). По завершении добавления прекращали охлаждение и раствор перемешивали при 50°С в течение 4 часов. После охлаждения смесь вылили в насыщенный KHSO4 (водный, 1000 мл) и разбавили этилацетатом (EtOAc) (500 мл). Слои разделили и водный слой экстрагировали EtOAc (3×750 мл). Объединенные органические слои промыли водой и рассолом (1×500 мл в каждом случае). После осушения над Na2SO4 растворитель выпарили с получением желтого масла (205,6 г, 0,45 моля, количественный выход).
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-(3-метиламино-пропил)-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (24)[пример 13 в таблицах ниже]
Сырое спиросоединение (23) (162,8 г, 0,36 моля) растворили в растворе метиламина и этилового спирта (Fluka, 8M, 1154 мл, 9,23 моля). Добавили йодид натрия (2,16 г, 0,014 моля) и раствор перемешивали при 70°С под атмосферой N2 в течение 3 дней. После охлаждения реакционную смесь разбавили водой и этилацетатом (500 мл в каждом случае). Водный слой экстрагировали этилацетатом (3× 800 мл). Органический слой промыли рассолом (500 мл). После осушения над Na2SO4 упарили растворитель с получением желтого масла. Это масло очищали колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2/MeOH 90:10, содержащий 1% 7N NH3/MeOH) c получением 30 г соединения (24) с чистотой 93% (согласно HPLC/MS), 96% (115 г, 0,25 моля, 70%).
Изменение типа замещения фенильного кольца в спирокаркасе 8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-она (22)
Смесь 61,1 г (0,40 моля) пиперидонгидратгидрохлорида (25), 112,8 г (0,46 моля) дигидронополмезилата (20), 69,0 г (0,46 моля) NaI, 273 г (1,97 моля) K2CO3 и 4,3 л метилэтилкетона кипятили с обратным холодильником всю ночь. Смесь охладили до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Твердый остаток растворили в дихлорметане (1,5 л) и в воде (1,5 л) и слои разделили. Органический слой промыли водой (1 л) и осушили над Na2SO4. Слой концентрировали в вакууме с получением 113 г сырого продукта, который подвергли очистке колоночной хроматографией (SiO2, гептан:этилацетат, 6:11:1) и получили на выходе 77,7 г (0,31 моля, 78%) соединения (26) в виде оранжевого масла.
Раствор 20,0 г (80,2 ммоля) (26) и 8,4 мл (87 ммоля) 3-фторанилина (27а) в 65 мл уксусной кислоты охладили на холодной водяной бане. В течение 10 мин добавляли по каплям 10,7 мл (80,2 ммоля) триметилсилилцианида, поддерживая температуру ниже 40°С. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и вылили в смесь водного аммония (80 мл) и льда (80 г). Концентрированным NH3 pH довели до 10. Смесь экстрагировали хлороформом (3×200 мл). Объединенные органические слои осушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме, что дало 40,0 г сырого продукта, который подвергли очистке колоночной хроматографией (SiO2, гептан:этилацетат, 1:1) и получили 28,7 г (77,7 ммоля, 97%) соединения (28а). Сырой продукт также можно использовать в следующей стадии без очистки.
Смесь 28,7 г (78 ммоля) соединения (28а), 135 мл муравьиной кислоты и 135 мл уксусного ангидрида перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. Реакцию контролировали методами 1H-ЯМР-спектроскопии и масс-спектроскопии. По завершении реакции реакционную смесь вылили в лед с водой (800 мл). pH довели до 10 добавлением 33%-го NaOH (водного). Водный слой экстрагировали дихлорметаном (3×1 л). Объединенные органические слои осушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Твердый остаток растворили в 550 мл трет-бутилового спирта, 45 мл воды и 45 мл концентрированного водного аммония. При комнатной температуре добавили по каплям 90 мл 35%-го пероксида водорода. Смесь перемешивали всю ночь. Реакцию контролировали методом тонкослойной хроматографии (TLC). Добавили 900 мл воды и смесь экстрагировали дихлорметаном (3×500 мл). Объединенные органические слои осушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением 29,3 г (76 ммоль, 98%) соединения (29а) в виде желтого сухого вещества, который использовали в следующей стадии без очистки.
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-(3-фтор-фенил)-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (30а): [пример 9 в таблицах ниже]
Раствор 29,3 г (76 ммоль) соединения (29а) в 400 мл формамида нагревали в течение 2 часов при 200°С. Раствор поменял цвет из желтого в черный. Реакцию контролировали методом 1H-ЯМР-спектроскопии. По завершении реакции смесь охладили до комнатной температуры и вылили в лед с водой (800 г). Смесь экстрагировали дихлорметаном (6×1 л). Объединенные органические слои осушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Твердый остаток растворили в 1,2 л метанола и добавили порциями 4,3 г (114 ммоль) боргидрида натрия. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и в течение еще одного часа при 60°С. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры и погасили 25 мл воды. Растворитель выпарили в вакууме. Твердый остаток растворили в 750 мл водного аммония и экстрагировали диметилхлорметаном (7×1,5 л). Объединенные органические слои осушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением 24,8 г сырого продукта, который подвергли очистке колоночной хроматографией (SiO2, гептан:этилацетат, 1:11:3). Растирание элюированного продукта в порошок с диэтиловым эфиром дало 3,44 г соединения (30а) (8,6 ммоля, 11,3% в расчете на соединение (26)) в виде белого сухого вещества.
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-(3-метокси-фенил)-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (30b): [пример 8 в таблицах ниже]
Последовательность стадий повторили, исходя из 68,0 г (0,27 моля) соединения (26); Соединение (30b) подвергли очистке колоночной хроматографией и растиранием в порошок с диэтиловым эфиром, что дало 13,9 г (34 ммоль, 12% выход в расчете на соединение (26)) в виде не совсем белого сухого вещества.
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-(3-хлор-фенил)-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (30с): [пример 7 в таблицах ниже]
Последовательность стадий повторили, исходя из 67,4 г (0,27 моля) соединения (26); Соединение (30с) подвергли очистке колоночной хроматографией и растиранием в порошок с диэтиловым эфиром, что дало 7,42 г (17,8 ммоля, 6,6% выход в расчете на соединение (26)) в виде не совсем белого сухого вещества.
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-(3-трифторметил-фенил)-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (30d): [пример 10 в таблицах ниже]
Для получения соединения (30d) выполнили ту же самую последовательность стадий, но вместо желательного продукта выделили соединение (29d). Поэтому последовательность стадий частично повторили. Соединение формилировали муравьиной кислотой и уксусным ангидридом, нагревали в формамиде и, в конце концов, восстановили боргидридом натрия. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией (SiO2, этилацетат) и впоследствии растиранием в порошок с диэтиловым эфиром, что дало 7,39 г (6,6% общий выход в расчете на соединение (26)) в виде белого сухого вещества.
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-(4-фтор-фенил)-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (30е): [пример 5 в таблицах ниже]
Последовательность стадий повторили, исходя из 45,0 г (0,18 моля) соединения (26); Соединение (30е) очищали колоночной хроматографией и растиранием в порошок с диэтиловым эфиром, что дало 9,82 г (24,5 ммоля, 13,6% выход в расчете на соединение (26)) в виде серого сухого вещества.
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-(4-метокси-фенил)-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (30f): [пример 6 в таблицах ниже]
Последовательность стадий повторили, исходя из 45,0 г (0,18 моля) соединения (26); Соединение (30f) очищали колоночной хроматографией и растиранием в порошок с диэтиловым эфиром, что дало 8,94 г (21,7 ммоля, 12,1% выход в расчете на соединение (26)) в виде белого сухого вещества.
К раствору 44,9 г (0,225 моля) трет-бутилового сложного эфира 4-оксо-пиперидин-1-карбоновой кислоты (31) в 500 мл ацетонитрила последовательно добавили 59,5 г (0,27 моля) йодида триметилсульфоксония и 18,9 г (0,338 моля) тонко измельченного гидроксида калия. Реакционную смесь тщательно перемешивали в течение двух дней в атмосфере азота при комнатной температуре. После полной конверсии растворитель выпарили в вакууме и твердый остаток сняли дихлорметаном. Органический слой промыли водным раствором лимонной кислоты (6×), осушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Этот сырой продукт использовали без дополнительной очистки в следующей стадии (43,5 г, 0,204 моля, 90,6% выход).
2,6 г (5,74 ммоля) соединения (24) поместили в колбу и разбавили 20 мл этанола. К этому раствору добавили 1,88 г (8,81 ммоля) эпоксида (32) и смесь кипятили с обратным холодильником до тех пор, пока метод тонкослойной хроматографии не показал полную конверсию. Для обработки реакционной смеси растворитель выпарили и твердый остаток сняли этилацетатом. После промывания водным раствором карбоната калия, сушки над сульфатом натрия и концентрирования в вакууме сырой материал очищали колоночной флэш хроматографией, что дало светло-желтое вязкое масло (3,51 г, 5,15 ммоля, 89,8% выход).
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3-[(4-гидрокси-пиперидин-4-илметил)-метил-амино]-пропил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он (34): [пример 37 в таблицах ниже]
Бутилоксикарбонильное производное (Boc-производное) (33) (2,79 г, 4,19 ммоля) растворили в тетрагидрофуране (25 мл). К этому раствору добавили 2 мл концентрированного водного раствора HCl и получающуюся в результате смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. После того как метод тонкослойной хроматографии показал полную конверсию, при пониженном давлении удалили растворитель и получающийся в результате твердый остаток растворили в этилацетате. Промывание раствором карбоната калия, осушение органического слоя сульфатом натрия и концентрирование в вакууме обеспечили чистое указанное в подзаголовке соединение в виде светло-желтого вязкого масла (2,37 г, 3,8 ммоля, 90,7% выход).
Эпоксид (32) (46 г, 216 ммоля) растворили в диоксане (300 мл). Добавили бензилметиламин (75 мл, 583 ммоль) и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 90 часов. Метод тонкослойной хроматографии показал полную конверсию. Смесь упарили досуха. Избыток бензилметиламина удалили выпариванием в вакууме (0,05 мбар (5 Па), 80°С). Выход: 69,3 г аминоспирта (35) (96%) в виде оранжевого масла.
Спирт (35) (69,3 г, 200 ммоль) растворили в диметилформамиде (500 мл). В течение 30 мин добавляли 5-ю порциями NaH (9,2 г, 230 ммоль), промытый пентаном. По завершении добавления смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 45 мин. За 1,5 мин добавили метилйодид (14,8 мл, 240 ммоль). Смесь перемешивали в течение 1,5 часов при температуре окружающей среды. Метод тонкослойной хроматографии показал почти 80-90% конверсию. Добавили дополнительные NaH (0,8 г, 20 ммоль) и метилйодид (1,2 мл, 20 ммоль) и смесь перемешивали в течение еще 2 часов при температуре окружающей среды. Избыток NaH разложили водой (100 мл) и смесь дополнительно разбавили водой (3,5 л). Смесь экстрагировали этилацетатом (2×1л, 500 мл). Органический слой промыли рассолом (1 л), осушили над Na2SO4 и концентрировали досуха. Следы диметилформамида удалили выпариванием в вакууме (0,4 мбар (40 Па), 80°С). Остающуюся смесь очистили на силикагеле (элюент: гептан/этилацетат, 4/1-3/1 объем/объем). Выход: 55,2 г амина (36) (80%) в виде светло-желтого масла.
Амин (36) (55 г, 158 ммоль) растворили в этилацетате (500 мл). Добавили палладиевый катализатор (Pd-C) (10%, влажный, 5 г) и смесь перемешивали в течение 23 часов в атмосфере водорода (1 бар (105 Па)). Метод тонкослойной хроматографии показал неполную конверсию. Добавили дополнительный Pd-C (2,5 г) и смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 бар (105 Па)) в течение 110 часов. Метод ЯМР-спектроскопии показал полную конверсию. Смесь профильтровали через Целит, порцию Целита промыли этилацетатом и фильтрат выпарили досуха. Твердый остаток подвергли очистке перегонкой (высоковакуумной перегонкой из колбы в колбу, 0,04 мбар (4 Па), 130°С), что дало 35 г соединения (37) (86%) в виде бесцветного масла.
Синтез 8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3-[(4-метокси-пиперидин-4-илметил)-метил-амино]-пропил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-она (39) [пример 45 в таблицах ниже], исходя из хлорида (23) и амина (36), осуществили таким же способом, как описано ниже (общие методики).
Создание библиотеки с 8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-(2-метиламино-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-оном в качестве исходного вещества
Библиотека амидов, способ I:
Производное N-метиламина (40) (1,832 г, 4,24 ммоля) растворили в 170 мл дихлорметана. Этот основной раствор использовали для получения амидов с участием различных растворов хлорангидридов следующим образом: 2 мл основного раствора (0,05 ммоля соединения (40)) обработали полимерсвязанным морфолином (0,162 ммоля). После перемешивания в течение 20 мин при комнатной температуре добавили соответствующий хлорангидрид (0,06 ммоля) в 2 мл дихлорметана и перемешивание продолжили в течение 1 дня при комнатной температуре. Реакцию контролировали методом тонкослойной хроматографии. Для того чтобы избавиться от остающихся хлорангидрида и производного N-метиламина, добавили соответственно полимерсвязанный трисамин и изоцианатный реагент (оба используют в качестве поглотителей). Вновь продолжили перемешивание при комнатной температуре и делали это в течение ночи, затем удалили полимеры фильтрацией. Фильтраты концентрировали при пониженном давлении. Используя этот протокол, синтезировали 69 соединений. Сродство каждого синтезированного амида к ORL1 рецептору человека измеряли по реакции связывания рецептора in vitro.
Библиотека амидов, способ II:
К 200 мкл исходных растворов основных растворов (0,25М в тетрагидрофуране) добавили 200 мкл исходных растворов хлорангидридов (0,25М в тетрагидрофуране), с последующим добавлением 50 мкл раствора триэтиламина (1,0М в тетрагидрофуране). После встряхивания в течение ночи (17 часов) при 30°С растворитель выпарили и сырые продукты сняли диметилсульфоксидом для анализа. (Примечание: нерастворимые реагенты добавили вручную). Используя этот протокол, синтезировали 26 соединений. Сродство каждого синтезированного амида к ORL1 рецептору человека измеряли по реакции связывания рецептора in vitro.
Библиотека Раскрытия Эпоксидов:
Производное N-метиламина (40) (1,316 г, 3,0 ммоль) растворили в 120 мл изопропилового спирта. Этот основной раствор использовали для получения аминоспиртов с участием различных растворов эпоксидов следующим образом: к 2 мл основного раствора (0,05 ммоля) соединения (40)) добавили раствор соответствующего эпоксида (0,075 ммоля) в 2 мл изопропилового спирта. Эту смесь нагрели до 80°С и грели в течение 2 дней. Для контроля за реакциями использовали метод тонкослойной хроматографии. Для обработки реакционной смеси добавили соответственно полимерсвязанный трисамин и изоцианатный реагент (оба используют в качестве поглотителей). Вновь продолжили перемешивание при комнатной температуре и делали это в течение 2 дней, и затем удалили полимеры простой фильтрацией. Фильтраты концентрировали при пониженном давлении. Используя этот протокол, синтезировали 27 соединений. Сродство каждого синтезированного аминоспирта к ORL1 рецептору человека измеряли по реакции связывания рецептора in vitro.
Библиотека карбамидов (мочевины):
К 200 мкл исходных растворов основных растворов (0,25М в тетрагидрофуране) добавили 200 мкл исходных растворов изоцианидов (0,25М) в тетрагидрофуране. Пробирки (пузырьки) закрыли и после встряхивания в течение ночи (17 часов) при 30°С растворитель выпарили и сырые продукты сняли диметилсульфоксидом для анализа. Используя этот протокол, синтезировали 71 соединение.
Библиотека сульфонамидов:
Исходные растворы приготовили из основных растворов (0,25М) в тетрагидрофуране и растворов сульфонилхлоридов (0,25М) в тетрагидрофуране. К 200 мкл основного раствора добавили 200 мкл раствора сульфонилхлорида с последующим добавлением 50 мкл 1,0М раствора диизопропилэтиламина (DIPEA) в тетрагидрофуране. Пробирки (пузырьки) закрыли и грели при 30°С в течение 16 часов. Продукты очищали катионообменной твердофазной экстракцией. Растворитель выпарили и сырые продукты сняли диметилсульфоксидом для анализа. Используя протокол, синтезировали 69 соединений.
Библиотека алкилирования:
Исходные растворы приготовили из основных растворов (0,25М) в диметилформамиде и растворов галогенидов (0,25М) в диметилформамиде. К 200 мкл основного раствора добавили 200 мкл раствора галогенида, содержащего 1 эквивалент KI, с последующим добавлением 50 мкл раствора диизопропилэтиламина (1,0 М). Пробирки (пузырьки) закрыли и грели в течение 17 часов. Конкретные модификации: альфагалогенкетоны при 30°С; другие при 60°С. Продукты подвергли очистке катионообменной твердофазной экстракцией. Растворитель выпарили и сырые продукты сняли диметилсульфоксидом для анализа. Используя протокол, синтезировали 61 соединение.
Библиотека Карбаматов:
К основному раствору (200 мкл, 0,25 М) в тетрагидрофуране добавили раствор диизопропилэтиламина (50 мкл, 2М) в тетрагидрофуране с последующим добавлением исходного раствора хлорформата (200 мкл, 0,25М) в тетрагидрофуране. Пробирки (пузырьки) закрыли и встряхивали в течение 24 часов при 30°С. Продукты очищали катионообменной твердофазной экстракцией. Растворитель выпарили и сырые продукты сняли диметилсульфоксидом для анализа. Используя этот протокол, синтезировали 21 соединение.
Библиотека трет-карбамидов (трет-мочевины):
Методика проведения опыта:
Эта методика подчинена реакции карбамоилхлорида и 2×75 вторичных аминов. Все пробирки (пузырьки) и колбы следует сушить при 100°С в вакууме. Все растворители следует сушить (молекулярными ситами в случае CH2Cl2 и K2CO3 в случае CH3CN).
Стадия 1
9,2 ммоля основного раствора растворили в 92 мл дихлорэтана (молекулярные сита 4Å) и получили 0,1 М раствор. К этому раствору добавили 5,68 мл диизопропилэтиламина (3,5 экв.). Смесь охладили до 0°С (ледяная баня) и сразу же добавили раствор 2,728 г (4,6 ммоля) трифосгена в 36,8 мл дихлорэтана. Ледяную баню удалили и смесь перемешивали в течение 30 минут. Реакцию контролировали методом тонкослойной хроматографии и методами жидкостной хроматографии и масс-спектроскопии. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении в течение 1 часа при 40°С и 20 мбар (2000 Па). Сырой продукт растворили в 36,8 мл CH3CN (осушенный на K2CO3) и добавили 1,92 мл диизопропилэтиламина, получая 0,25 М раствор карбамоилхлорида (B).
Стадия 2
К 200 мкл раствора (0,25М) вторичных аминов в CH3CN добавили 200 мкл раствора (0,25М) карбамоилхлорида (В) в CH3CN с последующим добавлением 1 эквивалента диизопропиламина. Пробирки (пузырьки) закрыли и в течение 17 часов подвергали встряхиванию при 30°С. Реакционную смесь концентрировали, растворили в этилацетате и промыли 5%-ным раствором NaHCO3. Растворитель выпарили и сырой продукт сняли диметилсульфоксидом для анализа. Используя этот протокол синтезировали 49 соединений.
СИНТЕЗ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Синтоны, используемые для получения описанных примеров:
Реакции алкилирования с соединениями (24)/(40): общая методика:
Производное метиламина растворили в тетрагидрофуране и добавили 1,1 эквивалента диизопропилэтиламина. К этой смеси добавили соответствующий алкилирующий реагент (1 эквивалент) и раствор нагрели и кипятили с обратным холодильником, реакцию контролировали методом тонкослойной хроматографии. После полной конверсии раствор концентрировали и твердый остаток сняли водным раствором карбоната натрия. Водный слой экстрагировали несколько раз дихлорметаном. Объединенные слои сушили над сульфатом натрия, концентрировали и сырой продукт очищали колоночной хроматографией (SiO2, этилацетат или CH2Cl2/MeOH в качестве элюентов).
1,7 г производного метиламина (соединение 24) растворили в 4 мл 2-фторпиридина и кипятили с обратным холодильником при 150°С. После полной конверсии реакционную смесь вылили в воду и водный слой экстрагировали этилацетатом несколько раз. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и очищали колоночной хроматографией (SiO2, этилацетат).
Выход: 60% [пример 83 в таблицах ниже]
Реакции раскрытия эпоксидов с соединением (24)/(40):
Общая методика:
Производное метиламина растворили в EtOH/H2O (объем/объем=10/1,2 ммоль/мл). После добавления эпоксида (1,5 экв.) смесь нагрели до кипения (с обратным холодильником), реакцию контролировали методом тонкослойной хроматографии. После полной конверсии раствор концентрировали и твердый остаток сняли водным раствором карбоната калия. Водный слой экстрагировали несколько раз этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, концентрировали и сырой продукт дополнительно подвергли очистке колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2/MeOH в качестве элюентов).
3-{3-[(2,3-Дигидрокси-пропил)-метил-амино]-пропил}-8-[2-(6,6-диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он выход: 31% [пример 92 в таблицах ниже]
3-{2-[(2,3-Дигидрокси-пропил)-метил-амино]-этил}-8-[2-(6,6-диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он выход: 46% [пример 178 в таблицах ниже]
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3-[(2-гидрокси-циклогексил)-метил-амино]-прпил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4,5]декан-4-он выход: 80% [пример 29 в таблицах ниже] (прим. при синтезе в качестве дополнительного основания использовали карбонат калия (2,5 экв.))
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3-[(2-гидрокси-3-морфолин-4-ил-пропил)-метил-амино]-пропил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он выход: 65% [пример 93 в таблицах ниже]
Реакции замещения с соединением (23):
Как правило, реакции замещения проводят в апротонном полярном растворителе (например, в ацетонитриле, диметилсульфоксиде или N-диметилформамиде) следующим образом:
Исходное вещество растворили в соответствующем растворителе. 0,1 экв. йодида натрия и 2 экв. основания (например, карбоната калия или диизопропилэтиламина) поместили в реакционную колбу и затем к этому раствору добавили соответствующий амин (2-4 экв.). Реакционную смесь нагрели и контролировали реакцию методом тонкослойной хроматографии. После стандартной водной обработки реакционной смеси твердый остаток дополнительно очищали колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2/MeOH в качестве элюентов).
Получение оптически чистых исходных веществ в соответствии с литературными методиками [J.Prakt.Chem.329, 235 (1987)]
2-Метиламино-циклогексанол
Оксид циклогексана (147 г, 1,5 моля) растворили в 8М растворе метиламина в этаноле (750 мл) и перемешивали при 40°С в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, что дало рацемический 2-метиламиноциклогексанол в виде светло-коричневого масла (195 г, 100%). Согласно данным газовой хроматографии этот продукт был не менее 99% чистоты и его использовали без дополнительной очистки.
Соль (1R,2R)-2-метиламино-циклогексанол-(R)-миндальной кислоты и (1S,2S)-2-метиламино-циклогексанол-(S)-миндальная кислота
Рацемический 2-метиламино-циклогексанол (195 г, макс. 1,5 моля) и (R)-(-)-миндальную кислоту (228 г, 1,5 моля) добавили к 2-пропанолу (1,2 л) и нагрели до температуры кипения (с обратным холодильником). Раствору дали медленно остыть до комнатной температуры и перемешивали всю ночь. Образовавшийся осадок собрали фильтрацией, промыли 2-бутаноном и сушили на воздухе, что дало белое сухое вещество (160 г, энантиомерный избыток (e.e.)=92%). Маточный раствор концентрировали, что дало коричневое масло (275 г), которое затвердевает при стоянии. Белое сухое вещество грели в течение 10 мин при температуре кипения с обратным холодильником в 2-бутаноне (1,7 л). Смеси дали остыть до комнатной температуры при перемешивании и в течение 16 часов перемешивали при комнатной температуре. Осадок собрали фильтрацией и сушили на воздухе, что дало соль (1R,2R)-2-метиламино-циклогексанол-(R)-миндальной кислоты (151,5 г, 538 ммоль, 36%) в виде белого сухого вещества с e.e. 99%.
Первый маточный раствор (275 г, 0,98 моля) добавили к раствору NaOH (200 г, 5 моль) в воде (800 мл) и рассолу (насыщенному раствору NaCl) (800 мл). Добавили дихлорметан (400 мл) и после перемешивания в течение 15 мин слои разделили. Водный слой вновь экстрагировали дихлорметаном (3×400 мл). Объединенные дихлорметаном органические слои сушили (Na2SO4) и концентрировали, что дало коричневое масло (118,5 г, 93,5% выход). Это масло очищали перегонкой Кугельрота (p=0,3 мбар (30 Па), T=70-80°С), что дало (1S, 2S)-2-метиламино-циклогексанол (105 г, 813 ммоль, 83% выход) с e.e. 66%. Этот обогащенный материал растворили в 2-пропаноле (700 мл). Добавили (S)-(+)-миндальную кислоту (124 г, 815 ммоль) и смесь нагрели до температуры кипения (с обратным холодильником). Получающемуся в результате раствору дали медленно остыть до комнатной температуры и при этой температуре перемешивали в течение 16 часов. Образовавшийся осадок собрали фильтрацией, промыли 2-бутаноном и сушили на воздухе, что дало белое сухое вещество (172 г). Эту первую соль нагрели и кипятили с обратным холодильником в течение 15 мин в 2-бутаноне (2,0 л). Смеси (получили непрозрачный раствор) дали медленно остыть до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Осадок собрали фильтрацией и сушили, что дало соль (1S, 2S)-2-метиламино-циклогексанол-(S)-миндальной кислоты (160 г, 569 ммоль, 38%) в виде белого сухого вещества с e.e.>99%.
(1R,2R)-(-)-2-Метиламино-циклогексанол [Для определения взаимосвязи конфигурации и вращения смотри J.Pract.Chem. 329, 235 (1987), и Tetrahedron Asymm., 10, 4619 (1999)]
NaOH (108 г, 2,69 моля) растворили в воде (350 мл). Добавили рассол (400 мл) и охладили до комнатной температуры. Добавили дихлорметан (300 мл) и соль (1R, 2R)-2-метиламино-циклогексанол-(R)-миндальной кислоты (151,5 г, 538 ммоль) и в течение 10 мин смесь тщательно перемешивали. Слои разделили и водный слой вновь экстрагировали дихлорметаном (3×200 мл) (разделение слоев является процедурой, требующей времени). Объединенные дихлорметаном органические слои сушили (Na2SO4) и концентрировали, что дало масло (67,7 г, 97% выход). Это масло объединили с двумя другими порциями: 2,3 г и 6,4 г (обе с e.e.=99+%) и очистили перегонкой Кугельрота (p=0,5 мбар (50 Па), T=80-90°С), что дало бесцветное масло (72,0 г, 92%) с 94% чистотой согласно данным газовой хроматографии. Это масло вновь подвергли перегонке Кугельрота (p=0,3 мбар (30 Па)), что дало продукт, содержащий фракции: Фракция 1; T=40-60°С: 11,6 г с 89% чистотой согласно данным газовой хроматографии, Фракция 2; Т=60-65°С: 60,1 г GI0302-1 в виде бесцветного масла с 99% чистотой и e.e. 99,5%. []670=-51,5 (c=0,14, метанол).
(1S,2S)-(+)-2-Метиламино-циклогексанол [Для определения взаимосвязи конфигурации и вращения смотри J.Pract.Chem. 329, 235 (1987), и Tetrahedron Asymm., 10, 4619 (1999)]
NaOH (108 г, 2,69 моля) растворили в воде (400 мл). Добавили рассол (400 мл) и охладили до комнатной температуры. Добавили хлороформ (300 мл) и соль (1S,2S)-2-метиламино-циклогексанол-(S)-миндальной кислоты (160 г, 569 ммоль) и в течение 5 мин смесь тщательно перемешивали. Слои разделили и водный слой вновь экстрагировали хлороформом (3×350 мл). Объединенные хлороформом слои сушили (Na2SO4) и концентрировали, что дало масло (68 г, 93% выход). Это масло очищали перегонкой Кугельрота (p=0,1 мбар (10 Па)), что дало две фракции, содержащие продукт:
Фракция 1: Т=40-55°С: 17,5 г в виде бесцветного масла с 99% чистотой согласно данным газовой хроматографии,
Фракция 2: Т=55-60°С: 48,8 г в виде бесцветного масла с 99,9% чистотой согласно данным газовой хроматографии.
Обе фракции объединили и получили 66,2 г (512 ммоль, 90%) в виде бесцветного масла с e.e. 99,9% []670=+53,6 (c=0,14, метанол).
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3R-[(2R-гидрокси-циклогексил)-метил-амино]-пропил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 30 в таблицах ниже]
2,5 г бициклического хлорсодержащего соединения (23) растворили в 5 мл ацетонитрила. К этому раствору последовательно добавили 1,5 г (2 экв.) карбоната калия, 90 мг (0,1 экв.) йодида натрия, 780 мг (1R,2R)-(-)-2-метиламино-циклогексанола и, в заключение, 3 капли воды. Эту смесь нагрели и кипятили с обратным холодильником в течение 8 часов. Для обработки реакционную смесь разбавили этилацетатом и промыли сначала водной лимонной кислотой и потом водным раствором гидрокарбоната натрия. Органический слой сушили над сульфатом натрия, концентрировали и твердый остаток дополнительно очищали колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2/MeOH в качестве элюента), что дало 1,75 г (58%) светло-желтого масла.
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3S-[(2S-гидрокси-циклогексил)-метил-амино]-пропил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 31 в таблицах ниже]
Соединение получали в соответствии с протоколом, приведенным выше для стереоизомера. Выход: 48% в виде светло-желтого масла.
Реакции Манниха с бороновыми кислотами
Следующий экспериментальный протокол использовали для синтеза нескольких соединений аналогичным способом, соответственно исходя из соединения (40) и соединения (24).
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3-[(1-фуран-2-ил-2,3,4,5-тетрагидрокси-пентил)-метил-амино]-пропил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 52 в таблицах ниже]
Раствор амина (24) (2,66 г, 5,876 ммоля) и 2-фуранил-борной кислоты (920 мг, 8,22 ммоля) в 30 мл EtOH и 0,5 мл H2O нагрели до 40°С при тщательном перемешивании. К этому раствору маленькими порциями в течение 15 мин при 40°С добавили 1,06 г (7,05 ммоля) D-(+)-ксилозы.
По истечении 2,5 часов реакционную смесь вылили в водный раствор NaHCO3 и водный слой экстрагировали 3 раза дихлорметаном. Объединенные органические слои концентрировали и сняли этилацетатом. Этот органический слой промыли несколько раз водной лимонной кислотой (10%). Объединенные водные слои затем нейтрализовали водным раствором NaHCO3 и нейтральный водный слой экстрагировали CH2Cl2. Объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме, что обеспечило сырое желтое масло, которое очищали колоночной хроматографией (SiO2, этилацетат/метанол: 20/1-10/1). Очистка дала на выходе названное в подзаголовке соединение в виде аморфного белого сухого вещества (1,40 г, 2,14 ммоля, 37%).
Альтернативная методика обработки реакционной смеси: После полной конверсии (контроль методом тонкослойной хроматографии) реакционную смесь охладили до комнатной температуры, добавили 1 мл трифторуксусной кислоты и остающийся раствор перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. После концентрирования в вакууме проводили дополнительную очистку сырого продукта колоночной хроматографией.
Используя такую же методику, как описана выше, синтезировали следующие образцы:
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{3-[метил-(2,3,4,5-тетрагидрокси-1-тиофен-2-ил-пентил)-амино]-пропил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 59 в таблицах ниже] выход 80% (D-ксилоза и 2-тиофенил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[метил-(2,3,4,5-тетрагидрокси-1-тиофен-2-ил-пентил)-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 58 в таблицах ниже] выход 13% (D-ксилоза и 2-тиофенил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[(1-фуран-2-ил-2,3,4,5,6-пентагидрокси-гексил)-метил-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 55 в таблицах ниже] выход: 75% (D-глюкоза и 2-фуранил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[(1-фуран-2-ил-2,3,4,5-тетрагидрокси-пентил)-метил-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 53 в таблицах ниже] выход: 42% (D-ксилоза и 2-фуранил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[(1-фуран-2-ил-2,3,4,5-тетрагидрокси-пентил)-метил-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 52 в таблицах ниже] выход: 60% (L-ксилоза и 2-фуранил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[(1-фуран-2-ил-2,3-дигидрокси-пропил)-метил-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 49 в таблицах ниже] выход: 66% (D,L-глицериновый альдегид и 2-фуранил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
3-{2-[(2,3-Дигидрокси-1-тиофен-3-ил-пропил)-метил-амино]-этил}-8-[2-(6,6-диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 47 в таблицах ниже] выход: 39% (D,L-глицеринальдегид и 3-тиофенил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[метил-(2,3,4,5-тетрагидрокси-1-тиофен-3-ил-пентил)-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 48 в таблицах ниже] выход: 28% (L-арабиноза и 3-тиофенил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[метил-(2,3,4,5-тетрагидрокси-1-тиофен-3-ил-пентил)-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 55 в таблицах ниже] выход: 21% (L-ксилоза и 3-тиофенил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
8-[2-(6,6-Диметил-бицикло[3.1.1]гепт-2-ил)-этил]-3-{2-[метил-(2,3,4,5,6-пентагидрокси-1-тиофен-3-ил-гексил)-амино]-этил}-1-фенил-1,3,8-триаза-спиро[4.5]декан-4-он [пример 54 в таблицах ниже] выход: 16% (D-глюкоза и 3-тиофенил-бороновая кислота в качестве исходных веществ)
Далее изобретение проиллюстрировано с помощью следующих конкретных примеров (предназначенных только для того, чтобы дополнительно проиллюстрировать изобретение более детально, и, следовательно, так или иначе не рассматриваемых как ограничение объема изобретения), перечисленных в таблице ниже и представленных общими формулами (1) и (2):
Там, где в таблице ниже в колонке под заголовком «стереохимия» приведено название соединения (например, (-)-цис-гидронопол или D-ксилоза), это означает, что соединение по существу использовали в конечной стадии реакции.
Аналитические данные примеров из вышеприведенной таблицы приведены в таблице ниже. Подробности методов анализа перечисленных в таблице, а именно: "BASIS", "STANDARD", "CURVE 4", "AMAP 2" и "AMAP3" пояснены ниже.
Пр
Молекулярная формула
Молеку- лярный вес
Темп. плав- ления
MH+
Время удер-жива- ния
Метод
1
C24 H35 N3 O
381,560
-
382
7,630
BASIS
2
C24 H35 N3 O
381,560
187-189°C
-
3
C24 H35 N3 O
381,560
180,9°C
-
-
-
4
C24 H35 N3 O
381,560
187,9°C
-
-
-
5
C24 H34 F N3 O
399,551
189-191C
-
-
-
6
C25 H37 N3 О2
411,586
156-157°C
-
-
-
7
C24 H34 Cl1 N3 O
416,006
144-145°C
-
-
-
8
C25 H37 N3 О2
411,586
152-153°C
-
-
-
9
C24 H34 F N3 О
399,551
198-199°C
-
-
-
10
C25 H34 F3 N3 О
449,558
174-176°C
-
-
-
11
C28 H43 N3 О3
469,666
-
470
3,990
CURVE4
12
C27 H42 N4 O
438,656
439
6,500
BASIS
13
C28 H44 N4 O
452,683
453
3,340
CURVE 4
14
C29 H46 N4 O
466,709
467
6,870
BASIS
15
C30 H48 N4 O
480,736
481
7,030
BASIS
16
C31 H50 N4 O
494,763
495
7,130
BASIS
17
C34 H48 N4 O
528,780
529
1,195
AMAP2
18
C33 H53 N5 O2
551,815
552
1,135
AMAP 2
19
C35 H48 N4 O3
572,789
573
3,580
CURVE 4
20
C34 H49 N5 O3 S
607,859
608
3,430
STANDARD
21
C29 H46 N4 O
466,709
467
6,730
BASIS
22
C29 H46 N4 O
466,709
467
3,310
CURVE 4
23
C35 H48 F2 N4 O
578,787
579
9,530
BASIS
24
C34 H50 N5 O
544,803
545
3,450
CURVE 4
25
C34 H49 N5 O
543,795
544
3,940
CURVE 4
26
C34 H49 N5 O
543,795
545
3,770
STANDARD
27
C40 H60 N4 O3
644,939
645
3,980
CURVE 4
28
C35 H54 N4 O3
578,837
579
5,350
STANDARD
29
C34 H54 N4 O2
550,827
551
7,000
BASIS
30
C34 H54 N4 O2
550,827
551
7,000
BASIS
31
C34 H54 N4 O2
550,827
551
3,340
CURVE 4
32
C36 H58 N4 O2
564,853
565
3,350
CURVE 4
33
C35 H56 N4 O2
578,889
579
3,390
CURVE 4
34
C37 H60 N4 O2
592,907
593
3,460
CURVE 4
35
C39 H63 N5 O4
665,958
666
3,690
CURVE 4
36
C33 H53 N5 O2
551,815
552
4,700
CURVE 4
37
C34 H55 N5 O2
565,841
566
3,090
CURVE 4
38
C35 H57 N5 O2
579,868
580
3,140
CURVE 4
39
C36 H59 N5 O2
593,895
594
3,100
CURVE 4
40
C45 H63 N5 O2
706,026
706
3,810
CURVE 4
41
C37 H61 N5 O2
607,922
608
4,460
STANDARD
42
C42 H63 N5 O3
685,992
686
3,540
CURVE 4
43
C38 H61 N5 O4
651,931
652
3,480
CURVE 4
44
C36 H57 N5 O4
623,877
624
3,150
CURVE 4
45
C35 H57 N5 O2
579,868
580
4,480
STANDARD
46
C35 H57 N7 O2
607,882
608
3,190
CURVE 4
47
C36 H57 N5 O3
607,878
608
3,630
CURVE 4
48
C37-,H60 N6 O3
636,920
637
3,330
CURVE 4-
49
C34 H50 N4 O3 S
594,860
595
8,230
BASIS
50
C36 H54 N4 O5 S
654,912
655
3,690
CURVE 4
51
C34 H50 N4 O4
578,793
579
8,200
BASIS
52
C37 H56 N4 O6
652,871
653
7,870
BASIS
53
C36 H54 N4 O6
638,845
639
7,870
BASIS
54
C36 H54 N4 O6
638,845
639
7,830
BASIS
55
C37 H56 N4 O7
668,870
669
3,530
CURVE 4
56
C37 H56 N4 O6 S
684,937
685
2,720
CURVE 4
57
C36 H54 N4 O5 S
654,912
655
2,740
CURVE 4
58
C36 H54 N4 O5 S
654,912
655
3,690
CURVE 4
59
C37 H56 N4 O5 S
668,938
669
7,370
BASIS
60
C38 H54 N4 O2
598,871
599
7,370
BASIS
61
C38 H50 C11 F3 N4 O2
687,286
687
4,600
CURVE 4
62
C38 H52 N4 O
580,856
581
8,700
BASIS
63
C37 H52 Cl1 N5 O
618,305
618
4,820
CURVE 4
64
C37 H53 N5 O
583,860
584
4,340
CURVE 4
65
C37 H52 F1 N5 O
601,850
602
4,360
CURVE 4
66
C33 H52 N4 O2
536,800
537
3,260
CURVE 4
67
C33 H51 N5 O2
549,799
550
3,270
CURVE 4
68
C30 H46 N4 O2
494,719
495
4,460
STANDARD
69
C37 H52 N4 O
568,845
569
5,210
STANDARD
70
C30 H46 N4 O
478,720
479
4,58
STANDARD
71
C36 H60 N6 O2
608,910
609
3,200
CURVE 4
72
C40 H59 Cl1 N6 O2
691,399
691
4,350
CURVE 4
73
C39 H59 N7 O2
657,942
658
3,630
CURVE 4
74
C41 H62 N6 O2
670,981
671
3,560
CURVE 4
75
C40 H60 N6 O2
656,954
657
3,930
CURVE 4
76
C37 H62 N6 O2
622,937
623
3,180
CURVE 4
77
C37 H62 N6 O2
622,937
623
3,010
CURVE 4
78
C41 H61 Cl1 N6 O2
705,426
705
3,800
CURVE 4
79
C40 H61 N7 O2
671,969
672
3,400
CURVE 4
80
C42 H64 N6 O2
685,008
686
3,300
CURVE 4
81
C41 H62 N6 O2
670,981
671
3,590
CURVE 4
82
C38 H64 N6 O2
636,964
638
3,050
CURVE 4
83
C33 H47 N5 O
529,768
530
4,370
CURVE 4
84
C34 H48 N4 O
528,780
529
3,560
CURVE 4
85
C36 H50 N4 O2
570,817
571
4,470
CURVE 4
86
C26 H37 N3 O3
439,596
440
4,750
STANDARD
87
C31 H42 N4 O
486,700
487
5,900
CURVE 4
88
C35 H54 N4 O3
578,837
579
4,280
CURVE 4
89
C35 H48 N4 O3
572,789
573
3,970
CURVE 4
90
C37 H52 N4 O5
632,841
633
5,760
STANDARD
91
C34 H56 N4 O6
616,838
617
4,500
STANDARD
92
C31 H50 N4 O3
526,761
528
3,340
STANDARD
93
C35 H57 N5 O3
595,867
596
3,240
CURVE 4
94
C34 H56 N4 O3
568,841
569
3,430
CURVE 4
95
C30 H46 N4 O3
510,723
511
5,360
STANDARD
96
C35 H46 N4 O4
586,772
587
5,840
CURVE 4
97
C36 H44 F6 N4 O2
678,762
679
7,060
STANDARD
98
C34 H46 N4 O2
542,768
543
6,000
STANDARD
99
C34 H45 Br1 N4 O2
621,664
621
6,290
STANDARD
100
C34 H41 F5 N4 O2
632,718
633
6,500
STANDARD
101
C34 H44 Cl2 N4 O2
611,658
611
6,610
STANDARD
102
C35 H48 N4 O3
572,794
573
5,960
STANDARD
103
C35 H45 F3 N4 O2
610,765
611
6,400
STANDARD
104
C35 H48 N4 O2
556,795
557
6,140
STANDARD
105
C34 H45 F1 N4 O2
560,758
561
6,100
STANDARD
106
C34 H45 Cl1 N4 O2
577,213
577
6,330
STANDARD
107
C34 H44 Cl2 N4 O2
611,658
611
6,690
STANDARD
108
C35 H48 N4 O3
572,794
573
6,070
STANDARD
109
C35 H48 N4 O3
572,794
573
6,020
STANDARD
110
C34 H45 F1 N4 O2
560,758
561
6,350
STANDARD
111
C34 H45 Cl1 N4 O2
577,213
577
5,980
STANDARD
112
C35 H48 N4 O3
572,794
573
7,680
STANDARD
113
C40 H58 N4 O3
642,929
643
6,490
STANDARD
114
C35 H45 F3 N4 O2
610,765
611
6,890
STANDARD
115
C38 H54 N4 O2
598,876
599
6,210
STANDARD
116
C35 H48 N4 O2
556,795
557
5,750
STANDARD
117
C30 H44 N4 O4
524,706
525
5,950
STANDARD
118
C33 H50 N4 O4
566,787
567
6,150
STANDARD
119
C32 H50 N4 O2
522,778
523
6,090
STANDARD
120
C37 H50 N4 O4
614,831
615
6,080
STANDARD
121
C35 H48 N4 O2
556,795
557
6,090
STANDARD
122
C34 H45 Cl2 N5 O2
626,669
626
1,606
AMAP2
123
C31 H47 N5 O2
521,745
522
1,403
AMAP2
124
C34 H53 N5 O4
595,824
596
1,460
AMAP2
125
C39 H55 N5 O4
657,894
658
1,536
AMAP2
126
C35 H46 F3 N5 O3
641,774
642
1,568
AMAP2
127
C33 H53 N5 O2
551,815
552
1,494
AMAP2
128
C34 H53 N5 O4
595,824
596
1,451
AMAP2
129
C34 H46 Br N5 O2
636,674
636
1,536
AMAP2
130
C36 H51 N5 O3
601,831
602
1,553
AMAP2
131
C37 H51 N5 O4
629,841
630
1,616
AMAP2
132
C36 H51 N5 O2
585,832
586
1,556
AMAP2
133
C34 H45 Cl2 N5 O2
626,669
626
1,583
AMAP2
134
C34 H45 Cl2 N5 O2
626,669
626
1,597
AMAP2
135
C34 H46 Br N5 O2
636,674
636
1,552
AMAP2
136
C32 H48 N4 O2
520,762
521
5,840
STANDARD
137
C33 H52 N4 O2
536,805
537
6,310
STANDARD
138
C30 H46 N4 O2
494,724
495
5,630
STANDARD
139
C36 H50 N4 O2
570,822
571
6,330
STANDARD
140
C29 H41 Cl3 N4 O2
584,032
583
6,540
STANDARD
141
C29 H42 Cl2 N4 O2
549,587
549
5,980
STANDARD
142
C37 H50 N4 O2
582,833
583
6,380
STANDARD
143
C35 H54 N4 O2
562,843
563
6,700
STANDARD
144
C34 H52 N4 O2
548,816
549
6,310
STANDARD
145
C32 H44 N4 O3
532,729
533
5,710
STANDARD
146
C33 H46 N4 O2 S1
562,817
563
6,020
STANDARD
147
C41 H48 N4 O3
644,860
645
6,420
STANDARD
148
C36 H50 N4 O3
586,821
587
6,150
STANDARD
149
C31 H46 N4 O4
538,733
539
5,510
STANDARD
150
C33 H45 N5 O2
543,756
544
5,340
STANDARD
151
C41 H52 N4 O2
632,893
633
6,760
STANDARD
152
C31 H46 N4 O4
538,733
539
5,540
STANDARD
153
C43 H64 N4 O2
543,196
543
6,140
STANDARD
154
C31 H47 CM N4 O2
543,196
543
6,270
STANDARD
155
C33 H51 Cl1 N4 O2
571,250
571
7,540
STANDARD
156
C39 H53 Cl1 N4 O2
645,332
645
6,440
STANDARD
157
C37 H52 N4 O3
600,848
601
6,510
STANDARD
158
C36 H46 N4 O2 S1
598,850
599
6,460
STANDARD
159
C35 H45 F3 N4 O3
626,764
627
6,630
STANDARD
160
C37 H49 N7 O2
623,846
624
6,410
STANDARD
161
C33 H43 Cl2 N5 O2
612,646
612
6,460
STANDARD
162
C36 H51 N5 02 S1
617,897
618
6,380
STANDARD
163
C33 H43 Cl2 N5 O2
612,646
612
6,440
STANDARD
164
C38 H47 Cl1 F1 N5 O3
676,277
676
6,230
STANDARD
165
C34 H43 F3 N4 O2
596,738
597
7,000
STANDARD
166
C37 H49 F3 N4 O3
654,818
655
6,480
STANDARD
167
C40 H51 N5 O2 S1
665,941
666
6,390
STANDARD
168
C39 H48 Cl1 N5 O3
670,298
670
6,370
STANDARD
169
C33 H45 Cl1 N4 O3 S1
613,261
613
6,490
STANDARD
170
C38 H47 F3 N6 O2
676,828
677
7,210
STANDARD
171
C38 H56 N4 O2
600,892
601
6,560
STANDARD
172
C37 H47 F3 N4 O2
636,803
637
6,180
STANDARD
173
C36 H54 N6 O2
602,868
603
6,300
STANDARD
174
C36 H54 N6 O2
602,868
603
6,400
STANDARD
175
C34 H46 Cl1 N5 O3
608,227
608
7,270
STANDARD
176
C37 H51 Cl1 N4 O3
635,293
635
6,300
STANDARD
177
C37 H54 N4 O4
618,863
619
6,730
STANDARD
178
C30 H48 N4 O3
512,734
513
3,280
CURVE 4
179
C35 H50 N4 O2
558,806
559
4,140
CURVE 4
180
C30 H48 N4 O2
496,735
497
3,450
CURVE 4
181
C30 H47 F N4 O2
514,725
515
3,710
CURVE 4
182
C36 H51 Cl N4 O3
623,277
623
4,410
CURVE 4
183
C37 H54 N4 O4
618,858
619
4,090
CURVE 4
184
C40 H60 N4 O3
644,939
645
4,980
CURVE 4
185
C33 H54 N4 O3
554,815
555
3,810
CURVE 4
186
C38 H64 N4 O3
624,949
626
5,530
CURVE 4
187
C33 H52 N4 O3
552,799
553
3,800
CURVE 4
188
C34 H56 N4 O3
568,841
569
4,110
CURVE 4
189
C31 H48 N4 O2
508,746
509
3,730
CURVE 4
190
C31 H50 N4 O2
510,762
511
3,570
CURVE 4
191
C35 H56 N4 O2
564,853
565
4,390
CURVE 4
192
C35 H58 N4 O2
566,869
567
4,740
CURVE 4
193
C38 H51 N5 O4
641,852
642
3,980
CURVE 4
194
C34 H56 N4 O3
568,841
569
3,930
CURVE 4
195
C33 H52 N4 O2
536,800
537
3,960
CURVE 4
196
C38 H54 N4 O5
646,868
647
4,180
CURVE 4
197
C35 H52 N4 O4
592,820
593
3,890
CURVE 4
198
C30 H45 F3 N4 O2
550,706
551
4,150
CURVE 4
199
C32 H48 F4 N4 O3
612,748
613
4,150
CURVE 4
200
C34 H55 N5 O3
581,841
582
3,400
CURVE 4
201
C37 H60 N4 O2
592,907
593
5,090
CURVE 4
202
C36 H52 N4 O2
572,833
573
4,060
CURVE 4
203
C32 H50 N4 O2
522,773
523
4,010
CURVE 4
204
C32 H50 N4 O4
554,771
555
4,020
CURVE 4
205
C41 H61 Cl N6 O2
705,425
706
1,344
AMAP2
206
C33 H54 N4 O2
538,815
539
1,414
AMAP2
207
C38 H54 N4 O4
630,868
631
1,487
AMAP2
208
C30 H48 N4 O3
512,734
513
1,282
AMAP2
209
C39 H66 N4 O2
622,976
623
1,713
AMAP2
210
C41 H70 N4 O2
651,030
652
1,768
AMAP2
211
C31 H50 N4 O3
526,761
527
1,318
AMAP2
212
C43 H74 N4 O2
679,083
680
1,850
AMAP2
213
C45 H78 N4 O2
707,137
708
1,921
AMAP2
214
C32 H50 N4 O2
522,773
523
1,327
AMAP2
215
C38 H54 N4 O5
646,867
647
1,414
AMAP2
216
C35 H54 N4 O2
562,837
563
1,374
AMAP2
217
C41 H54 N4 O2
634,903
635
1,483
AMAP2
218
C40 H52 N4 O
604,878
605
1,315
AMAP2
219
C38 H50 N4 O
578,840
579
1,251
AMAP2
220
C40 H52 N4 O2
620,877
621
1,307
AMAP2
221
C40 H52 N4 O
604,878
605
1,332
AMAP2
222
C38 H50 N4 O
578,840
579
1,296
AMAP2
223
C37 H51 N5 O
581,844
582
1,216
AMAP2
224
C33 H47 N5 O
529,768
530
1,171
AMAP2
225
C35 H47 F3 N4 O
596,777
597
1,310
AMAP2
226
C33 H47 N5 O
529,768
530
1,136
AMAP2
227
C31 H48 N4 O
492,747
493
1,153
AMAP2
228
C35 H47 Cl1 N4 O3
607,234
607
1,273
AMAP2
229
C35 H47 F3 N4 O2
612,776
613
1,298
AMAP2
230
C36 H50 N4 O2
570,817
571
1,212
AMAP2
231
C35 H56 N4 O
548,854
549
1,255
AMAP2
232
C38 H56 N4 O
584,887
585
1,315
AMAP2
233
C35 H50 N4 O2
558,806
559
1,217
AMAP2
234
C35 H47 N5 O
553,790
554
1,245
AMAP2
235
C33 H49 N5 O2
547,783
548
1,187
AMAP2
236
C35 H50 N4 O3 S
606,871
607
1,305
AMAP2
237
C35 H50 N4 O
542,807
543
1212
AMAP2
238
C37 H50 N6 O3
626,841
627
1,209
AMAP2
239
C34 H47 F N4 O
546,770
547
1,214
AMAP2
240
C41 H54 N4 O2
634,904
635
1,307
AMAP2
241
C34 H47 Cl1 N4 O
563,225
563
1,251
AMAP2
242
C48 H60 N4 O3
741,027
741
1,369
AMAP2
243
C35 H47 F3 N4 O2
612,776
613
1,321
AMAP2
244
C32 H52 N4 O
508,790
509
1,192
AMAP2
245
C36 H52 N4 O
556,834
557
1,228
AMAP2
246
C30 H47 N5 O2
509,734
510
1,099
AMAP2
247
C32 H46 N6 O3
562,754
563
1,273
AMAP2
248
C37 H54 N4 O2
586,860
587
1,228
AMAP2
249
C32 H45 Cl1 N4 OS
569,253
569
1,339
AMAP2
250
C31 H48 N4 O3
524,745
525
1,144
AMAP2
251
C36 H52 N4 O
556,834
557
1,237
AMAP2
252
C29 H43 N5 O
477,693
478
1,392
AMAP2
253
C34 H47 F N4 O
546,770
547
1,221
AMAP2
254
C35 H47 F3 N4 O
596,777
597
1,301
AMAP2
255
C35 H47 N5 O
553,790
554
1,377
AMAP2
256
C32 H52 N4 O
508,790
509
1,197
AMAP2
257
C29 H46 N4 O2
482,708
483
1,103
AMAP2
258
C34 H47 Cl1 N4 O
563,225
563
1,268
AMAP2
259
C42 H52 N4 O
628,900
629
1,430
AMAP2
260
C35 H50 N4 O
542,807
543
1,229
AMAP2
261
C34 H47 Br N4 O
607,676
607
1,258
AMAP2
262
C35 H50 N4 O
542,807
543
1,207
AMAP2
263
C35 H47 N5 O
553,790
554
1,244
AMAP2
264
C35 H48 N4 O2
556,790
557
1,226
AMAP2
265
C29 H45 N5 O2
495,707
496
1,106
AMAP2
266
C37 H52 N4 O4
616,842
617
1,235
AMAP2
267
C39 H58 N4 O2
614,913
615
1,298
AMAP2
268
C38 H52 N4 O4
628,853
629
1,231
AMAP2
269
C41 H52 N4 O2
632,888
633
1,435
AMAP2
270
C31 H50 N4 O
494,763
495
1,164
AMAP2
271
C42 H54 N4 O
630,916
631
1,337
AMAP2
272
C36 H52 N4 O2
572,833
573
1,227
AMAP2
273
C34 H47 F N4 O
546,770
547
1,199
AMAP2
274
C35 H50 N4 O2
558,806
559
1,209
AMAP2
275
C33 H47 N5 O
529,768
530
1,167
AMAP2
276
C35 H50 N4 O2
558,806
559
1,202
AMAP2
277
C40 H51 N5 O3
649,875
650
1,579
AMAP2
278
C35 H49 N5 O2
571,805
572
1,441
AMAP2
279
C40 H51 N5 O2
633,876
634
1,594
AMAP2
280
C40 H51 N5 O2
633,876
634
1,595
AMAP2
281
C35 H49 N5 O3
587,804
588
1,503
AMAP2
282
C34 H46 F N5 O2
575,768
576
1,479
AMAP2
283
C35 H46 N6 O2
582,788
583
1,434
AMAP2
284
C38 H57 N5 O2
615,901
616
1,599
AMAP2
285
C34 H46 F N5 O2
575,768
576
1,465
AMAP2
286
C35 H49 N5 O3
587,804
588
1,449
AMAP2
287
C35 H46 N6 O2
582,788
583
1,456
AMAP2
288
C37 H51 N5 O4
629,841
630
1,516
AMAP2
289
C36 H51 N5 O2
585,832
586
1,484
AMAP2
290
C40 H53 N5 O2
635,892
636
1,564
AMAP2
291
C34 H45 Cl2 N5 O2
626,669
626
1,465
AMAP2
292
C34 H46 Cl1 N5 O2
592,223
592
1,524
AMAP2
293
C34 H46 Cl1 N5 O2
592,223
592
1,522
AMAP2
294
C32 H51 N5 O2
537,788
538
1,467
AMAP2
295
C36 H51 N5 O2
585,832
586
1,490
AMAP2
296
C32 H51 N5 O2
537,788
538
1,451
AMAP2
297
C37 H53 N5 O5
647,856
648
1,417
AMAP2
298
C36 H51 N5 O4
617,830
618
1,482
AMAP2
299
C35 H47 N5 O3
585,788
586
1,429
AMAP2
300
C31 H49 N5 O2
523,761
524
1,390
AMAP2
301
C34 H46 N6 O4
602,775
603
1,464
AMAP2
302
C35 H49 N5 O2 S
603,871
604
1,532
AMAP2
303
C32 H49 N5 O4
567,770
568
1,392
AMAP2
304
C34 H46 Br N5 O2
636,674
636
1,535
AMAP2
305
C38 H55 N5 O2
613,885
614
1,650
AMAP2
306
C38 H53 N5 O4
643,868
644
1,498
AMAP2
307
C36 H51 N5 O4
617,830
618
1,510
AMAP2
308
C35 H49 N5 O2
571,805
572
1,459
AMAP2
309
C36 H51 N5 O2
585,832
586
1,472
AMAP2
310
C34 H45 Cl2 N5 O2
626,669
626
1,578
AMAP2
311
C37 H51 N5 O4
629,841
630
1,501
AMAP2
312
C34 H46 N6 O4
602,775
603
1,489
AMAP2
313
C36 H45 F6 N5 O2
693,773
694
1,660
AMAP2
314
C37 H53 N5 O2
599,859
600
1,509
AMAP2
315
C39 H55 N5 O4
657,894
658
1,591
AMAP2
316
C33 H51 N5 O4
581,797
582
1,395
AMAP2
317
C36 H59 N5 O2
593,895
594
1,631
AMAP2
318
C34 H45 F2 N5 O2
593,758
594
1,465
AMAP2
319
C34 H45 Cl2 N5 O2
626,669
626
1,606
AMAP2
320
C35 H49 N5 O2
571,805
572
1,497
AMAP2
321
C31 H47 N5 O2
521,745
522
1,403
AMAP2
322
C34 H53 N5 O4
595,824
596
1,460
AMAP2
323
C39 H55 N5 O4
657,894
658
1,536
AMAP2
324
C35 H46 F3 N5 O3
641,774
642
1,568
AMAP2
325
C33 H53 N5 O2
551,815
552
1,494
AMAP2
326
C34 H53 N5 O4
595,824
596
1,451
AMAP2
327
C34 H46 Br N5 O2
636,674
636
1,536
AMAP2
328
C36 H51 N5 O3
601,831
602
1,553
AMAP2
329
C37 H51 N5 O4
629,841
630
1,616
AMAP2
330
C36 H51 N5 O2
,585,832
586
1556
AMAP2
331
C34 H45 CI2 N5 O2
626,669
626
1,583
AMAP2
332
C34 H45 CI2 N5 O2
626,669
626
1,597
AMAP2
333
C34 H46 Br N5 O2
636,674
636
1,552
AMAP 2
334
C40 H59 N5 O2
641,939
642
1,601
AMAP2
335
C31 H47 N5 O4
553,743
554
1,363
AMAP2
336
C36 H51 N5 O2
585,832
586
1,509
AMAP 2
337
C35 H48 Cl1 N5 O3
622,249
622
1,551
AMAP2
338
C35 H45 Cl1 F3 N5 O2
660,221
660
1,614
AMAP2
339
C35 H45 Cl1 F3 N5 O2
660,221
660
1,648
AMAP2
340
C36 H51 N5 O3
601,831
602
1,475
AMAP 2
341
C34 H45 Cl1 N6 O4
637,221
637
1,596
AMAP 2
342
C38 H55 N5 O2
613,885
614
1,539
AMAP2
343
C35 H48 Cl1 N5 O2
606,250
606
1,481
AMAP2
344
C36 H50 Br N5 O2
664,728
664
1,543
AMAP2
345
C36 H57 N5 O4
623,877
624
1,470
AMAP2
346
C33 H51 N5 O4
581,797
582
1,421
AMAP 2
347
C34 H45 N7 O6
647,773
648
1,575
AMAP 2
348
C40 H56 N6 O4
684,920
685
1,169
AMAP2
349
C40 H55 N7 O3
681,920
682
1,348
AMAP2
350
C37 H51 N5 O2
597,843
598
1,476
AMAP2 *
351
C32 H47 N5 O2
533,756
534
1,372
AMAP2
352
C38 H54 N6 O2
626,885
627
1,456
AMAP2
353
C32 H49 N5 O3
551,771
552
1,320
AMAP2
354
C37 H53 N7 O2
627,873
628
1,229
AMAP2
355
C36 H52 N6 O2
600,847
601
1,220
AMAP2
356
C32 H49 N5 O2
535,772
536
1,357
AMAP2
357
C40 H55 N5 O4
669,906
670
1,497
AMAP2
358
C38 H53 F N6 O2
644,875
645
1,480
AMAP2
359
C39 H56 N6 O3
656,910
657
1,439
AMAP2
360
C39 H54 Cl1 N5 O3
676,341
676
1,431
AMAP2
361
C39 H53 F3 N6 O2
694,882
695
1,563
AMAP2
362
C39 H55 Cl1 N6 O2
675,357
676
1,236
AMAP2
363
C31 H47 N5 O2 S
553,811
554
1,374
AMAP2
364
C36 H58 N6 O4
638,892
639
1,104
AMAP2
365
C32 H51 N5 O2
537,788
538
1,414
AMAP2
366
C35 H53 M5 O4
607,835
608
1,386
AMAP2
367
C36 H55 N5 O4
621,862
622
1,409
AMAP2
368
C39 H52 N6 O2
636,880
637
1,466
AMAP2
369
C39 H55 N5 O3
641,896
642
1,388
AMAP2
370
C40 H53 N5 O2
635,892
636
1,525
AMAP2
371
C39 H56 N6 O3
656,910
657
1,423
AMAP2
372
C36 H52 N8 O2
628,861
629
1,332
AMAP2
373
C34 H52 N6 O3
592,824
593
1,263
AMAP2
374
C43 H57 N5 O2
675,956
676
1,616
AMAP2
375
C34 H55 N5 O4
597,839
598
1,355
AMAP2
376
C39 H53 F3 N6 O2
694,882
695
1,557
AMAP2
377
C32 H49 N5 O3
551,771
552
1,271
AMAP2
378
C34 H53 N5 O3
579,825
580
1,368
AMAP2
379
C41 H57 N7 O3
695,947
695
1,398
AMAP2
380
C38 H53 F N6 O2
644,875
645
1,486
AMAP2
381
C37 H53 N7 O2
627,873
628
1,145
AMAP2
382
C33 H51 N5 O3
565,798
566
1,258
AMAP2
383
C32 H51 N5 O3
553,787
554
1,301
AMAP2
384
C33 H51 N5 O3
565,798
566
1,272
AMAP2
385
C32 H51 N5 O2
537,788
538
1,410
AMAP2
386
C37 H51 N5 O4
629,841
630
1,452
AMAP2
387
C33 H54 N6 O2
566,830
566
1,122
AMAP2
388
C37 H53 N5 O2
599,859
600
1,484
AMAP2
389
C32 H49 N5 O2
535,772
536
1,397
AMAP2
390
C33 H49 N5 O2
547,783
548
1,393
AMAP2
391
C33 H50 N6 O3
578,797
579
1,256
AMAP2
392
C40 H58 N6 O3
670,937
671
1,488
AMAP2
393
C31 H49 N5 O2
523,761
524
1,378
AMAP2
394
C38 H60 N6 O2
632,932
633
1,163
AMAP2
395
C30 H47 N5 O2
509,734
510
1,331
AMAP2
396
C37 H58 N6 O2
618,905
619
1,123
AMAP2
397
C34 H45 F2 N5 O2
593,758
594
1,465
AMAP2
398
C35 H49 N5 O2
571,805
572
1,497
AMAP2
399
C34 H46 N4 O3
558,762
559
1,985
AMAP3
400
C32 H50 N4 O3
538,772
539
2,010
AMAP3
401
C29 H44 N4 O3
496,692
497
1,914
AMAP3
402
C31 H46 N4 O3
522,729
523
1,950
AMAP3
403
C35 H48 N4 O4
588,788
589
1,976
AMAP3
404
C31 H48 N4 O4
540,744
541
1,885
AMAP3
405
C36 H58 N4 O3
594,879
595
2,206
AMAP3
406
C31 H48 N4 O3
524,745
525
1,966
AMAP3
407
C34 H45 F N4 O3
576,753
577
2,014
AMAP3
408
C34 H45 Cl N4 O3
593,208
593
2,036
AMAP3
409
C35 H47 N5 O5
617,786
618
1,981
AMAP3
410
C38 H60 N4 O3
620,917
621
2,249
AMAP3
411
C35 H48 N4 O3
572,789
573
2,040
AMAP3
412
C32 H50 N4 O3
538,772
539
2,002
AMAP3
413
C32 H48 N4 O3
536,756
537
1,995
AMAP3
414
C30 H46 N4 O3
510,718
511
1,918
AMAP3
415
C31 H44 N4 O3
520,714
521
1,919
AMAP3
416
C32 H47 Cl3 N4 O3
642,107
641
2,137
AMAP3
417
C34 H45 N5 O5
603,760
604
2,024
AMAP3
418
C30 H43 Cl3 N4 O3
614,054
613
2,043
AMAP3
419
C38 H60 N4 O3
620,917
621
2,280
AMAP3
420
C37 H48 N4 O3 S
628,877
629
1,519
AMAP2
421
C31 H44 N4 O3 S2
584,846
585
1,417
AMAP2
422
C36 H47 N5 O3 S
629,865
630
1,428
AMAP2
423
C39 H50 N4 O3 S
654,915
655
1,576
AMAP2
424
C37 H48 N4 O3 S
628,877
629
1,524
AMAP2
425
C33 H46 N4 O3 S
578,817
579
1,427
AMAP2
426
C33 H45 F N4 O3 S
596,807
597
1,439
AMAP2
427
C36 H52 N4 O3 S
620,898
621
1,571
AMAP2
428
C34 H48 N4 O5 S2
656,908
657
1,354
AMAP2
429
C34 H48 N4 O4 S
608,843
609
1,409
AMAP2
430
C33 H45 F N4 O3 S
596,807
597
1,426
AMAP2
431
C35 H50 N4 O5 S
638,869
639
1,375
AMAP2
432
C34 H45 F3 N4 O3 S
646,815
647
1,489
AMAP2
433
C34 H45 N5 O3 S
603,828
604
1,411
AMAP2
434
C37 H54 N4 O3 S
634,925
635
1,593
AMAP2
435
C39 H53 N5 O3 S
671,946
672
1,575
AMAP2
436
C33 H45 Cl1 N4 O3 S
613,263
613
1,502
AMAP2
437
C35 H49 N5 O4 S
635,869
636
1,327
AMAP2
438
C31 H43 Cl1 N4 O3S2
619,291
619
1,504
AMAP2
439
C34 H45 F3 N4 O3 S
646,815
647
1,494
AMAP2
440
C33 H44 N6 O3 S2
636,882
637
1,433
AMAP2
441
C33 H48 N6 O4 S2
656,912
657
1,332
AMAP2
442
C37 H48 N4 O5 S3
725,007
725
1,467
AMAP2
443
C36 H52 N4 O3 S
620,898
621
1,545
AMAP2
444
C35 H48 N4 O3 S
604,855
605
1,479
AMAP2
445
C35 H50 N4 O5 S
638,869
639
1,419
AMAP2
446
C33 H44 Cl2 N4 O3 S
647,708
647
1,563
AMAP2
447
C33 H44 F2 N4 O3 S
614,798
615
1,454
AMAP2
448
C34 H48 N4 O3 S
592,844
593
1,465
AMAP2
449
C33 H45 Cl1 N4 O3 S
613,263
613
1,474
AMAP2
450
C33 H45 Cl1 N4 O3 S
613,263
613
1,474
AMAP2
451
C33 H44 Cl2 N4 O3 S
647,708
647
1,480
AMAP2
452
C33 H44 Cl2 N4 O3 S
647,708
647
1,541
AMAP2
453
C33 H45 N5 O5 S
623,815
624
1,418
AMAP2
454
C28 H44 N4 O3 S
516,747
517
1,280
AMAP 2
455
C34 H45 F3 N4 O4 S
662,813
663
1,530
AMAP 2
456
C34 H48 N4 O3 S
592,844
593
1,465
AMAP 2
457
C33 H45 N5 O5 S
623,815
624
1,434
AMAP 2
458
C36 H52 N4 O3 S
620,898
621
1,584
AMAP
459
C34 H45 F3 N4 O3 S
646,815
647
1,499
AMAP
460
C33 H45 Br N4 O3 S
657,714
657
1,524
AMAP
461
C37 H48 N4 O5 S3
725,007
725
1,498
AMAP 2
462
C34 H48 N4 O5 S2
656,908
657
1,372
AMAP
463
C33 H45 Br N4 O3 S
657,714
657
1,488
AMAP 2
464
C34 H46 N4 O5 S
622,826
623
1,361
AMAP 2
465
C33 H45 N5 O5 S
623,815
624
1,424
AMAP
466
C33 H44 Cl2 N4 O3 S
647,708
647
1,596
AMAP
467
C31 H42 Cl2 N4 O3 S2
653,736
653
1,607
AMAP 2
468
C33 H45 Br N4 O3 S
657,714
657
1,527
AMAP
469
C37 H54 N4 O4 S
650,924
651
1,594
AMAP 2
470
C33 H45 I N4 O3 S
704,709
705
1,540
AMAP 2
471
C33 H44 Cl2 N4 O3 S
647,708
647
1,559
AMAP 2
472
C38 H56 N4 O3 S
648,951
649
1,679
AMAP 2
473
C34 H47 N5 O5 S
637,841
638
1,500
AMAP 2
474
C35 H44 F6 N4 O3 S
714,812
715
1,630
AMAP 2
475
C35 H50 N4 O3 S
606,871
607
1,541
AMAP
476
C31 H42 Cl2 N4 O3 S2
653,736
653
1577
AMAP
477
C34 H47 Br N4 O4 S
687,739
687
1,531
AMAP 2
478
C33H44Cl1FN4 O3 S
631,253
631
1,490
AMAP 2
479
C34 H47 F N4 O3 S
610,834
611
1,498
AMAP
480
C41 H55 N7 O3 S
725,997
726
1,682
AMAP 2
481
C33 H44 N6 O7 S
668,812
669
1,475
AMAP 2
482
C31 H42 Br2 N4 O3 S2
742,638
741
1,605
AMAP 2
483
C31H41BrCl2N4O3 S2
732,632
731
1,622
AMAP 2
484
C33 H44 Cl2 N4 O3 S
647,708
647
1,552
AMAP 2
485
C33 H43 Cl3 N4 O3 S
682,153
681
1,587
AMAP 2
486
C34 H47 Cl1 N4 O3 S
627,289
627
1,524
AMAP 2
487
C42 H64 N4 O3 S
705,059
705
1,819
AMAP 2
488
C36 H47 Cl1 N4 O3 S2
683,377
683
1,654
AMAP 2
АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ (ГАЗОВАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ-МАСС СПЕКТРОСКОПИЯ)
Система для Жидкостной Хроматографии и Масс-спектроскопии состоит из 2 микронасосов (Perkin Elmer серии 200). Насосы присоединены друг к другу Т-образным смесителем объемом 50 мкл. Смеситель присоединен к автоматическому прибору для взятия проб (Gilson 215).
Метод жидкостной хроматографии:
Шаг
Общее время
Поток (мкл/мин)
A(%)
B(%)
0
0
2300
95
5
1
1,6
2300
0
100
2
1,8
2300
0
100
3
1
2300
95
5
4
2,2
2300
95
5
A=100% воды с 0,025% HCOOH and 10 ммоль NH4HCOO pH=±3
B=100% ацетонитрила с 0,025% HCOOH
Автоматический пробоотборник имеет петлю для впрыскивания объемом 2 мкл. Автоматический пробоотборник присоединен к колонке (Phenomenex Luna C18(2) 30·4,6 мм) с частицами размером 3 мкм. Колонку термостатируют при 40°C в термошкафу для колонки (Perkin Elmer серии 200). Колонка присоединена к УФ-фотометру (ABI 785), применяемому для биосистем, с проточной кюветой объемом 2,7 мкл. Длину волны устанавливают 254 нм. УФ-фотометр присоединен к масс-спектрометру (Sciex API 150EX). Масс-спектрометр имеет следующие параметры:
Диапазон сканирования: 150-900 атомных единиц массы
Полярность: положительная
Режим сканирования: профильный (по сечению)
Разрешение Q1: единица
Длина шага: 0,10 атомных единиц массы
Время одного сканирования: 0,500 сек
Распылитель (NEB): 10
Газовая заслонка (CUR): 10
Источник йонов (IS): 5200 вольт
Температура (TEM): 325°C
Дефлектор (DF): 30 вольт
Потенциал фокусировки (FP): 225 вольт
Потенциал на входе (EP): 10 вольт
Детектор светорассеяния присоединен к Sciex API 150. Детектор светорассеяния представляет собой детектор Sedere Sedex 55, функционирующий при 50°C и давлении N2 3 бар (3·105 Па). Вся система контролируется компьютером (Dell optiplex GX400), функционирующим в системе Windows NT.
МЕТОД AMAP 3
Идентичен методу AMAP 2, за исключением метода жидкостной хроматографии (LC), причем последний характеризуется следующими параметрами:
шаг
Общее Время
Поток (мкл/мин)
A(%)
B(%)
0
0
2300
95
5
1
1,8
2300
0
100
2
2,5
2300
0
100
3
2,7
2300
95
5
4
3,0
2300
95
5
ПРИМЕРЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОМПОЗИЦИИ, ВКЛЮЧАЮЩЕЙ СОЕДИНЕНИЕ, ИСПОЛЬЗУЕМОЕ В ИССЛЕДОВАНИЯХ НА ЖИВОТНЫХ
Для орального (per oral) введения желательное количество (вплоть до 20 мкмоль) сухого вещества Примера 1 добавили к 1 мл 1%-ной (вес/объем) метилгидроксиэтил-целлюлозы и 0,1%-ному (вес/объем) полоксамеру (poloxamer) в воде. Соединение суспендировали встряхиванием и перемешиванием в течение 10 минут.
Для подкожного (s.c.) введения желательное количество (вплоть до 15 мкмоль) сухого вещества Примера 1 растворили или суспендировали в 1 мл физиологического раствора.
Фармакологические данные
Сродство
In vitro агонизм
In vivo агонизм (проявление агонистических свойств)
Транзит
диарея
Гиперчувствительность
ORL1
µ-опиат
CAMP анализ (реакция)
Среднее время удерживания
Среднее число выбросов
Максимальное ингибирование
Пр.
pKi
PKi
PEC50
% контрольн.
% контрольн.
% контрольн.
1
9,3
7,7
10,2
49 (s.c.)
12
8,8
7,1
8,1
110 (s.c.)
13
8,9
7,4
8,7
105 (s.c.)
59 (s.c.)
14
9,2
7,2
9,9
111 (s.c.)
64 (s.c.)
15
8,5
7,5
16
9.1
7,4
17
8,6
7,0
21
8,1
7,4
22
8,2
7,4
28
9,2
8,0
106 (s.c.) 94 (p.o.)
78 (s.c.) 58 (p.o.)
35 (s.c.)
29
8,2
7,4
34
8,3
7,6
37
8,8
7,7
10,6
34 (s.c.)
39
9,4
7,2
42
8,2
7,4
45
8,5
8,1
51
9,1
7,9
102 (s.c.) 105 (p.o.)
45 (s.c.) 44 (p.o.)
58
8,1
7,4
59
8,1
7,4
61
9,2
7,7
68
7,9
7,6
70
8,1
7,6
83
8,6
7,8
91
8,1
7,4
214
8,0
7,3
219
8,2
6,7
223
7,9
7,1
230
8,0
7,0
233
7,6
6,8
238
7,9
7,0
275
8,1
7,4
277
8,1
7,0
279
7,7
6,8
285
7,9
7,1
292
8,2
7,1
293
7,9
7,0
298
8,1
7,1
313
7,8
6,9
315
8,0
6,8
327
7,9
7,1
328
7,7
6,9
346
8,0
6,9
Формула изобретения
1. Соединения общей формулы (1) в которой R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, (1-3С)алкоксигруппу, m является целым числом от 1 до 4, при условии, что, когда m равно 2, 3 или 4, заместители R1 могут быть или одинаковыми, или различными, R2 представляет собой атом водорода, алкильную (1-6С) группу, необязательно замещенную алкоксигруппой, циклоалкильную (3-6С) группу, -СН2ОН, -СН2ОСН3, ацетильную группу, бензильную группу, необязательно замещенную аминогруппой, или группу Q следующей структуры (2):
в которой []n символически изображает -(CH2)n-, где n является целым числом от 0 до 7, R3 представляет собой атом водорода или алкильную (1-3С)группу, R4 представляет собой атом водорода, алкильную (1-6С) группу, необязательно замещенную одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, насыщенное, ненасыщенное или частично насыщенное моно- или дициклическое 5-10-членное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, или алкильную (1-3С) группу, замещенную насыщенным, ненасыщенным или частично насыщенным пяти- или шестичленным кольцом, которое необязательно содержит один или более гетероатомов, таких как атом азота, атом кислорода или атом серы, необязательно замещенным одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, или (R3+R4) вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют собой насыщенное, ненасыщенное или частично насыщенное моно- или дициклическое пяти- или шестичленное кольцо, которое необязательно содержит один или более гетероатомов, таких как атом азота, атом кислорода или атом серы, необязательно замещенным одной или более группами, выбранными из алкильной группы, арильной группы, фтора, хлора, брома, гидроксильной группы, алкилоксигруппы, арилоксигруппы, ацилоксигруппы, аминогруппы, алкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, ариламиногруппы, тиогруппы, алкилтиогруппы, арилтиогруппы, цианогруппы, оксогруппы, нитрогруппы, ацильной группы, амидогруппы, алкиламидогруппы, диалкиламидогруппы, карбоксильной группы, и все стереоизомеры, а также фармакологически приемлемые соли.
2. Соединения по п.1 общей формулы (1), в которой R1 представляет собой атом водорода, галоген, CF3, (1-3С)алкоксигруппу, m=1, и все другие радикалы имеют значения, приведенные в п.1.
3. Соединения по п.2 общей формулы (1), в которой R2 представляет собой группу Q, имеющую общую формулу (2), и все другие радикалы имеют значения, приведенные в п.2.
4. Соединения по п.3 общей формулы (1), в которой R3 представляет собой метильную группу, R4 представляет собой алкильную (1-3С) группу, замещенную насыщенным, необязательно замещенным шестичленным кольцом, которое необязательно содержит один или более гетероатомов, таких как атом азота, атом кислорода, атом серы, и все другие радикалы имеют значения, приведенные в п.3.
5. Соединения по п.4 общей формулы (1), в которой R4 представляет собой метиленовую группу, замещенную необязательно замещенным пиперидиновым кольцом, и все другие радикалы имеют значения, приведенные в п.4.
6. Соединения по любому из пп.1-5, включая все их стереоизомеры, фармацевтически приемлемые соли и пролекарства для применения в медицине в качестве агонистов ORL1 рецептора.
7. Фармацевтические композиции, проявляющие агонистическую активность к ORL1 рецепторам, содержащие фармакологически активное количество, по меньшей мере, одного из соединений, по любому из пп.1-5 в качестве активного ингредиента.
8. Применение соединения по любому из пп.1-5 для получения фармацевтической композиции для лечения состояний острой и хронической боли, нарушений обмена веществ, ожирения; желудочно-кишечных расстройств, воспаления мочевого тракта, почечных расстройств, характеризующихся нарушениями баланса удержания/выделения воды или выделения соли, расстройств сердечно-сосудистой системы, офтальмологических расстройств, расстройств дыхательной системы, заболеваний иммунной системы и вирусных инфекций.
9. Применение по п.8, отличающееся тем, что указанными нарушениями обмена веществ являются нервная анорексия и нейрогенная булимия; что указанными желудочно-кишечными расстройствами являются синдром раздраженной толстой кишки, воспалительное заболевание кишечника (гранулематозный энтерит и язвенный колит), диарея, запор, боль в животе; что указанными расстройствами сердечно-сосудистой системы являются инфаркт миокарда, аритмия, повышенное кровяное давление, тромбоз, анемия, артериосклероз, стенокардия; что указанным офтальмологическим расстройством является глаукома; что указанными расстройствами дыхательной системы являются хроническое обструктивное заболевание легких, бронхит и кистозный фиброз.